人源諾如病毒衣殼蛋白細菌細胞表面展示體系的構(gòu)建與功能鑒定.pdf

1、人源諾如病毒（human noroviruses，HuNoVs）是非細菌型急性胃腸炎最主要的病原體之一。由于目前缺乏有效的體外培養(yǎng)模式及小型動物模型，HuNoVs的一些生物學(xué)特性尚不明確。重組類病毒粒子（virus-like particles，VLPs）或P粒子常作為HuNoVs替代物，用以研究病毒的免疫學(xué)特征以及病毒與其受體之間的相互作用。但是，從環(huán)境或食品樣品等復(fù)雜基質(zhì)中分離病毒受體時，很難獲得HuNoVs及其替代物與病毒受體的復(fù)

2、合物，已成為探究病毒受體以及病毒-受體互作機制的瓶頸。
　　為了解決這個瓶頸問題，本研究將HuNoVs GI.1及GII.4毒株主要衣殼蛋白VP1編碼基因ORF2或P結(jié)構(gòu)域編碼基因（ORF23’端）與冰晶核蛋白InaQ N端編碼基因inaQn相融合，在大腸桿菌BL21(DE3)中表達、分泌并最終錨定在其細胞表面，成功構(gòu)建HuNoVs細菌細胞展示體系。以重組菌全細胞酶免疫檢測、重組菌與HBGAs結(jié)合能力測定、膜蛋白-HBGAs-EL

3、ISA等方法對該體系進行驗證，結(jié)果顯示：在冰晶核蛋白InaQN的作用下，HuNoVs GI.1/GII.4重組VP1及P結(jié)構(gòu)域確已錨定在大腸桿菌BL21(DE3)細胞表面；錨定在大腸桿菌細胞表面的重組VP1及P結(jié)構(gòu)域可被其多克隆抗體識別、與病毒受體HBGAs相互作用，且與未融合InaQN的對照菌具有極顯著性差異(p<0.01)。另外，細菌細胞展示體系中HuNoVs GI.1及GII.4重組P結(jié)構(gòu)域與重組VP1表現(xiàn)的反應(yīng)原性及結(jié)合受體能力