甲基硒酸對(duì)血管新生和內(nèi)皮完整性的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、硒(selenium。Se)作為人體必需的微量營(yíng)養(yǎng)元素，對(duì)血管內(nèi)皮功能和穩(wěn)態(tài)有一定影響，但發(fā)揮作用的功能硒形態(tài)尚不清楚。最近研究表明，甲基硒酸（methylseleninic acid。MSA）作為膳食營(yíng)養(yǎng)硒代謝的重要中間產(chǎn)物，對(duì)細(xì)胞凋亡和PI3K/AKT信號(hào)有重要影響。為研究MSA對(duì)血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)的調(diào)控作用，本論文主要利用細(xì)胞成管模型、離體小鼠主動(dòng)脈莖環(huán)模型和雞胚尿囊膜模型，評(píng)價(jià)MSA對(duì)血管新生的抑制作用；采用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVE

2、C）研究了 MSA抑制血管新生的作用機(jī)制。以HUVEC構(gòu)建單層內(nèi)皮細(xì)胞模型，觀察了MSA對(duì)單層內(nèi)皮細(xì)胞完整性的影響，并研究了其中作用機(jī)制；同時(shí)采用小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7和小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞（BMDM）研究了MSA對(duì)兩種細(xì)胞攝取氧化低密度脂蛋白的影響。主要結(jié)果如下：
　　1．在細(xì)胞水平構(gòu)建了細(xì)胞粘附、遷移和成管模型，發(fā)現(xiàn)MSA提高HUVEC對(duì)鼠尾I型膠原粘附，抑制細(xì)胞遷移以及管腔狀結(jié)構(gòu)形成；此外，我們構(gòu)建了離體小鼠主動(dòng)脈莖環(huán)

3、模型和體內(nèi)雞胚尿囊膜模型，發(fā)現(xiàn)MSA明顯抑制主動(dòng)脈莖環(huán)血管出芽新生并降低雞胚尿囊膜上血管網(wǎng)絡(luò)豐度。提示，MSA具有抑制血管新生的效應(yīng)。
　　2.利用血管人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC研究MSA抑制血管新生作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2μM MSA并未引起細(xì)胞凋亡。QPCR和Western blot結(jié)果顯示，MSA下調(diào)integrinβ3，且存在劑量和濃度效應(yīng)；同時(shí)，MSA明顯抑制AKT/IκB/NF-κB級(jí)聯(lián)磷酸化以及NF-κB入核。免疫熒光

4、結(jié)果進(jìn)一步表明，MSA干擾integrinβ3在運(yùn)動(dòng)細(xì)胞膜上聚集。
　　3．利用HUVEC構(gòu)建單層內(nèi)皮細(xì)胞模型，發(fā)現(xiàn)MSA（5μM）處理12 h后，少量細(xì)胞發(fā)生凋亡，氧化低密度脂蛋白滲漏透過(guò)單層內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入Transwell下層；研究發(fā)現(xiàn)MSA可能通過(guò)調(diào)節(jié)鈣蛋白酶活性調(diào)控內(nèi)皮完整性。此外，通過(guò)小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7和BMDM發(fā)現(xiàn)，MSA處理對(duì)巨噬細(xì)胞攝取氧化低密度脂蛋白有一定抑制作用。
　　綜上所述，MSA具有抑制體內(nèi)