低強(qiáng)度脈沖超聲促進(jìn)大鼠牙囊細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的初步研究.pdf

1、目的：探討低強(qiáng)度脈沖超聲（Low-IntensityPulsed Ultrasound，LIPUS）對(duì)SD大鼠牙囊細(xì)胞（rat dental follicle cells, rDFCs）、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（rat bone marrow mesenchymal stem cells, rBMSCs）成骨分化能力的影響。
　　方法：體外分離培養(yǎng)rDFCs、rBMSCs，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記物表達(dá)，茜素紅染色、油紅染色鑒定細(xì)胞多

2、向分化能力；分別于第7d、21d采用定量PCR及茜素紅染色檢測(cè)LIPUS（30mW/cm2,20min/d）對(duì)rDFCs、rBMSCs體外成骨分化的影響；然后，將rDFCs、rBMSCs分別接種無(wú)機(jī)誘導(dǎo)因子復(fù)合性組織工程支架材料進(jìn)行培養(yǎng)，于第3、5、7、9天采用掃描電鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況；最后，分別構(gòu)建rDFCs-支架材料及rBMSCs-支架材料的細(xì)胞三維培養(yǎng)復(fù)合體，分組進(jìn)行裸鼠皮下移植：支架材料組（空白對(duì)照組）；rDFCs+支架材料組；

3、rBMSCs+支架材料組；rDFCs+支架材料組+LIPUS組；rBMSCs+支架材料+LIPUS組；LIPUS組（30mW/cm2,20min/d）對(duì)植入部位進(jìn)行輻照，8周后收集樣本，制作組織切片，HE和Masson染色觀察組織修復(fù)狀況。
　　結(jié)果：本研究成功分離培養(yǎng)rDFCs、rBMSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)提示兩種細(xì)胞均具有間充質(zhì)干細(xì)胞特征，茜素紅及油紅染色實(shí)驗(yàn)提示兩種細(xì)胞具備多向分化潛能；定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)LIPUS處理組 A

4、LP、Runx2、OSX、COL-1相對(duì)表達(dá)量較空白對(duì)照組更高；茜素紅染色結(jié)果顯示LIPUS處理組較對(duì)照組染色更明顯，鈣結(jié)節(jié)數(shù)量更多；掃描電鏡觀察結(jié)果顯示rDFCs、rBMSCs可順利粘附在材料上，隨培養(yǎng)時(shí)間的增加，支架材料表面及孔隙中可見(jiàn)大量細(xì)胞生長(zhǎng)，呈梭形，可見(jiàn)細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)；HE染色結(jié)果顯示空白對(duì)照組未見(jiàn)明顯細(xì)胞及新生組織存在。rDFCs+支架材料組及rBMSCs+支架材料組可見(jiàn)少量細(xì)胞及新生類(lèi)骨組織；rDFCs+支架材料組+

5、LIPUS組及rBMSCs+支架材料+LIPUS組支架材料間可見(jiàn)大量細(xì)胞及類(lèi)骨組織；Masson染色結(jié)果顯示空白對(duì)照組未見(jiàn)明顯細(xì)胞及新生纖維組織，rDFCs+支架材料組及rBMSCs+支架材料組可見(jiàn)少量細(xì)胞、新生纖維組織及血管組織存在；rDFCs+支架材料組+LIPUS組及rBMSCs+支架材料+LIPUS組細(xì)胞數(shù)量明顯增多，可見(jiàn)大量新生纖維組織及血管組織。
　　結(jié)論：體外聯(lián)合LIPUS輻照可在一定程度上增強(qiáng)rDFCs、rBMSC