新型喜樹(shù)堿類(lèi)似物FL118對(duì)順鉑耐藥非小細(xì)胞肺癌抑制作用的研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察新型喜樹(shù)堿類(lèi)似物FL118對(duì)順鉑耐藥非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）細(xì)胞系的增殖、遷移和順鉑耐藥的抑制作用，探討 FL118對(duì)抗耐順鉑腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制，為 FL118臨床治療順鉑耐藥肺癌提供理論支持。
　　方法：常規(guī)培養(yǎng)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和其順鉑耐藥細(xì)胞 A549/DDP,通過(guò) MTT法檢測(cè) A549/DDP的耐藥指數(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)耐藥蛋白P-gp、ERCC1的表達(dá)，從而驗(yàn)證A549/DDP細(xì)胞的順鉑耐

2、藥性。實(shí)驗(yàn)分組：A549組，A549/DDP組，A549順鉑處理組，A549/DDP順鉑處理組，A549+FL118處理組，A549/DDP+FL118處理組。MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞存活率；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)與Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移與侵襲能力；實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)和Western blot方法分別檢測(cè)耐藥相關(guān)蛋白P-gp、ERCC1、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）免疫標(biāo)志E-cadherin、Vimentin以及Surviv

3、in的mRNA和蛋白的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化。
　　結(jié)果：1.與A549細(xì)胞相比，A549/DDP細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形、排列呈旋渦狀或放射狀，類(lèi)似纖維細(xì)胞；MTT檢測(cè)A549/DDP耐藥指數(shù)為76.9（p<0.05），免疫細(xì)胞化學(xué)顯示 A549/DDP細(xì)胞中耐藥蛋白 P-gp、ERCC1表達(dá)顯著增高，同時(shí)上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)減弱，間質(zhì)標(biāo)志物vimentin表達(dá)增強(qiáng)，證實(shí)A549/DDP的順鉑耐藥性，而且具有上皮

4、間質(zhì)轉(zhuǎn)化特性。2. MTT方法發(fā)現(xiàn)FL118對(duì)A549/DDP細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯抑制作用,且抑制作用呈現(xiàn)時(shí)間和濃度依賴性，100nM FL118作用48h后對(duì)A549/DDP細(xì)胞抑制作用顯著強(qiáng)于A549細(xì)胞（p<0.05）。3.劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn) FL118作用后肺癌細(xì)胞的遷移能力下降（p<0.05），Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示FL118明顯抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲能力（p<0.05）。4.免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)及Western blot實(shí)

5、驗(yàn)結(jié)果顯示，耐藥細(xì)胞A549/DDP Survivin蛋白表達(dá)較A549顯著，F(xiàn)L118作用后，耐藥細(xì)胞中Survivin表達(dá)降低,并且耐藥蛋白P-gp、ERCC1表達(dá)也明顯降低； E-cadherin表達(dá)增強(qiáng)，Vimentin表達(dá)下降。5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，F(xiàn)L118可抑制Survivin基因表達(dá)，但對(duì)耐藥相關(guān)基因MDR1/P-gp、ERCC1無(wú)抑制作用,而E-cadherin、Vimentin mRNA的表達(dá)與蛋白表達(dá)結(jié)果

6、相一致。6.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) FL118作用后，A549及A549/DDP細(xì)胞均阻滯在S期（P<0.05）。
　　結(jié)論：FL118通過(guò)靶向抑制Survivin的表達(dá)，使順鉑耐藥A549/DDP細(xì)胞周期被阻滯在S期，抑制耐藥細(xì)胞的生長(zhǎng)，且其抑制作用呈濃度-時(shí)間依賴性；FL118不僅明顯抑制順鉑耐藥細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)侵襲能力，而且可以通過(guò)下調(diào)耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)增強(qiáng)耐藥細(xì)胞對(duì)FL118的敏感性，進(jìn)一步明確了FL118較強(qiáng)的對(duì)抗耐藥和侵襲性腫瘤作用。