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文檔簡介
1、第一部分載 HMME高分子增效劑的制備及性能檢測
目的:制備載血卟啉單甲醚(HematoPorphyrin Monomethyl Ether, HMME)的聚乳酸-羥基乙酸(Poly-lactic-co-glycolic acid, PLGA)多功能增效劑(HMME/PLGA),檢測其物理學(xué)、光學(xué)等一般特性;觀察HMME/PLGA對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞的相關(guān)作用。
方法:采用雙乳化法制備出HMME/PLGA,對(duì)其表面
2、形態(tài)、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、粒徑、電位、包封率及載藥量等一般特性進(jìn)行檢測。以 CCK8法檢驗(yàn)不同超聲處理時(shí)間(10 s、30 s、60 s、90 s)對(duì)卵巢癌 SKOV3細(xì)胞存活率的影響。實(shí)驗(yàn)分為5組:(I) cell(control group),(II) US+cell,(III) US+PLGA+cell,(IV) US+HMME+cell,(Ⅴ) US+HMME/PLGA+cell,治療參數(shù)為(超聲輻照聲強(qiáng)0.50 W/cm2,頻率1 MH
3、z,IV組和Ⅴ組HMME濃度20μg/ml)。并于上述細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上檢測卵巢癌SKOV3細(xì)胞12 h、24 h、36 h、48 h的存活率。
結(jié)果: HMME/PLGA為較均勻的粉紅色乳液,分散度較好。光鏡及掃描電鏡顯示,HMME/PLGA呈球形,形態(tài)規(guī)則,大小較均勻,透射電鏡下可見較多黑色的 HMME顆粒分布于外殼結(jié)構(gòu)中。激光共聚焦顯示HMME/PLGA表現(xiàn)出強(qiáng)烈的紅色熒光。Malvern激光粒徑儀檢測出HMME/PLGA
4、平均直徑為357±0.72 nm(PDI=0.932),Zeta電位為(?7.89 mV)mV。紫外-可見分光光度計(jì)檢測出 HMME/PLGA在紫外-可見光區(qū)域有一個(gè)范圍較寬的吸收光譜,除了在418 nm處有一個(gè)強(qiáng)的吸收光譜外,另外在500-700 nm之間(分別位于515,549,590,648 nm處)還有4個(gè)吸收光譜。HMME/PLGA包封率為(58.33±0.95)%,載藥量為(4.73±0.15)%。HMME/PLGA對(duì)卵巢癌
5、SKOV3細(xì)胞的急性細(xì)胞毒及抑制效應(yīng)實(shí)驗(yàn)顯示,(Ⅴ)( US+HMME/PLGA+cell)組較其余各組能明顯地降低 SKOV3細(xì)胞的存活率(P<0.05),抑制腫瘤細(xì)胞的增殖活性(P<0.05)。
結(jié)論:自制的HMME/PLGA高分子增效劑,形態(tài)規(guī)則、包封率較高,光學(xué)吸收性能良好,對(duì)卵巢癌 SKOV3細(xì)胞有明顯的殺傷、抑制功能,是一種有診療一體化潛能的新型增效劑。
第二部分載 HMME高分子增效劑超聲/光聲顯像研究
6、
目的:觀察 HMME/PLGA體內(nèi)外增強(qiáng)超聲及光聲成像的效果,了解HMME/PLGA增強(qiáng)光聲成像的能力及原理。
方法:體外成像部分以凝膠塊作為模型,以光聲成像儀分別對(duì)同等濃度的PBS、PLGA、HMME及HMME/PLGA進(jìn)行超聲圖像檢測,另外以波長為690 nm的脈沖激光激發(fā),檢測此四種樣品的光聲信號(hào)。以相同的方法對(duì)三種不同濃度(0.25 mg/ml,0.50 mg/ml,1.00 mg/ml)的HMME/PLG
7、A進(jìn)行超聲及光聲信號(hào)的觀察。建立裸鼠卵巢癌模型10只,于腫瘤種植后約一個(gè)月,隨機(jī)分為2組,分別經(jīng)裸鼠尾靜脈注入HMME/PLGA0.2 ml(HMME濃度為1.50 mg/ml),以波長為690 nm的脈沖激光激發(fā),觀察其對(duì)卵巢癌組織的超聲及光聲成像效果,了解其在卵巢癌組織的超聲、光聲信號(hào)強(qiáng)度隨時(shí)間變化的關(guān)系等。
結(jié)果:在體外成像實(shí)驗(yàn)中,同等濃度的情況下,HMME/PLGA表現(xiàn)出了最強(qiáng)的超聲信號(hào),HMME和PLGA的超聲信號(hào)強(qiáng)
8、度沒有明顯的差別, PBS的超聲信號(hào)強(qiáng)度最弱。HMME/PLGA光聲信號(hào)最強(qiáng),HMME次之,PLGA和PBS幾乎沒有光聲信號(hào)。三種不同濃度的HMME/PLGA,濃度最大者表現(xiàn)出了最強(qiáng)的超聲和光聲信號(hào),最小者超聲及光聲信號(hào)最弱。在裸鼠體內(nèi)卵巢癌組織成像實(shí)驗(yàn)中,隨著激光輻照時(shí)間的延長,腫瘤的光聲信號(hào)不斷增強(qiáng)。于同等情況下觀察到的腫瘤超聲信號(hào)雖有增強(qiáng),但增強(qiáng)效果較不明顯。
結(jié)論: HMME/PLGA具有體內(nèi)外增強(qiáng)超聲及光聲雙模態(tài)顯像
9、的能力,對(duì)卵巢癌的診斷具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
第三部分載HMME/PLGA高分子增效劑增效HIFU治療的研究
目的:觀察HMME/PLGA體內(nèi)外增效HIFU治療的效果,探討其相關(guān)增效機(jī)制。
方法:本部分研究分兩部分進(jìn)行。第一部分以離體牛肝作為模型,分為 PBS,PLGA, HMME和 HMME/PLGA四組。分別注入四組不同樣品200μl后(HMME濃度分別為0.25 mg/ml,0.50 mg/ml,1.0
10、0 mg/ml),以不同輻照聲功率(120 W,150 W,180 W)和不同時(shí)間(3 s,5 s,10 s)的HIFU處理,處理后觀察靶區(qū)灰度值的變化及凝固性壞死的體積、能效因子的不同,評(píng)價(jià)HMME/PLGA增效HIFU的效果。在第二部分實(shí)驗(yàn)中,建立裸鼠卵巢癌模型50只,隨機(jī)分為HIFU,PBS+HIFU,PLGA+HIFU,HMME+HIFU和 HMME/PLGA+HIFU五組。HIFU組給予單純HIFU輻照,后四組于腫瘤組織分別注
11、射200μl PBS, PLGA, HMME和HMME/PLGA(HMME濃度為1.50 mg/ml)后給予HIFU定點(diǎn)消融,處理參數(shù)為120 w、5s。處理結(jié)束后觀察消融區(qū)灰度變化值、凝固性壞死體積和能效因子、超微結(jié)構(gòu)的變化、PCNA、TUNEL等的差別,評(píng)價(jià)HMME/PLGA增效 HIFU治療腫瘤的效果。
結(jié)果:在第一部分體外實(shí)驗(yàn)中,與其余各組相比,HMME/PLGA組在同等實(shí)驗(yàn)條件下消融區(qū)灰度變化值和凝固性壞死體積最大,
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