雷公藤多苷聯(lián)合小檗堿對(duì)糖尿病大鼠腎臟JAK-STAT通路的作用.pdf

1、目的:
　　糖尿病腎病（Diabetic nephropathy，DN）是糖尿?。―iabetes mellitus，DM）的主要微血管病變之一，也是導(dǎo)致終末期腎?。‥nd stage renal disease, ESRD）的最主要原因之一。DN的發(fā)病機(jī)制不清，有研究發(fā)現(xiàn)持續(xù)低度的炎癥反應(yīng)的存在，在糖尿病腎病的發(fā)生與發(fā)展中起非常重要的作用。近年研究發(fā)現(xiàn)兩面神經(jīng)激酶（Janus Kinase，JAK）/信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子（Si

2、gnal transducers and activators of transcription，STAT）信號(hào)通路參與了糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展。近年研究報(bào)道表明雷公藤多苷及小檗堿均具有降低糖尿病腎病患者尿蛋白水平的作用，但具體作用機(jī)制尚不明確。本研究應(yīng)用2型糖尿?。╰ype2 diabetes mellitus， T2DM）的大鼠模型為研究對(duì)象，以雷公藤多苷（tripterygium wilfordii glycosides， TWP

3、）以及小檗堿（berberine，BBR）作為干預(yù)的藥物，探討不同劑量雷公藤多苷及小檗堿在T2DM大鼠腎臟JAK/STAT的信號(hào)通路的影響作用及其可能機(jī)制。
　　方法:
　　清潔級(jí)雄性SD大鼠一共130只，隨機(jī)選取其中10只SD大鼠飼以常規(guī)飼料，作為正常對(duì)照組；其余120只大鼠采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量STZ（30mg/kg）尾靜脈注射誘導(dǎo)T2DM模型。將造模成功的SD大鼠隨機(jī)分為糖尿病對(duì)照組（DM）、低、中、高劑量TW

4、P組（TL,1mg/kg?d、TM,3mg/kg?d、TH,6mg/kg?d）、BBR及低、中、高劑量TWP聯(lián)合BBR組（BBR,150mg/kg?d、TBL，1mg/kg?d+150mg/kg?d、 TBM,3mg/kg?d+150mg/kg?d、 TBH,6mg/kg?d+150mg/kg），SD大鼠造模成功后即開(kāi)始灌胃。觀察大鼠藥物灌胃前后不同時(shí)間點(diǎn)代謝指標(biāo)的變化。采用ELISA方法檢測(cè)SD大鼠血清中ICAM-1和IL-6水平的變

5、化，采用qPCR方法檢測(cè)JAK2、STAT3、SOCS1、ICAM-1和IL-6的mRNA表達(dá)量， Western blotting方法分別觀察p-JAK2、p-STAT3、SOCS1、ICAM-1和IL-6在腎組織中的表達(dá)情況，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法行ICAM-1和IL-6的蛋白表達(dá)定位及半定量分析。
　　結(jié)果:
　?。?）SD大鼠經(jīng)過(guò)高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周后，與NC組相比，高糖高脂喂養(yǎng)的SD大鼠血清TG、TC、FINS、HO

6、MA-IR和HOMA-β指數(shù)顯著升高(P<0.05)，但血糖無(wú)明顯變化（P>0.05）。STZ注射后大鼠的血糖較NC組顯著升高(P<0.05)，且應(yīng)用TWP及BBR治療后未發(fā)生明顯變化（P<0.05）。各組大鼠的肝腎功能及血常規(guī)在灌胃8周末時(shí)，無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　?。?）24h尿UMA水平：與NC組相比，DM組大鼠UMA明顯升高（P<0.05）， TWP、BBR、TWP聯(lián)合BBR組大鼠UMA較DM組呈劑量依賴性降低，且

7、以TM組、TH組、TBM組、TBH組降低最明顯（P<0.05）。
　?。?）ELISA方法檢測(cè)大鼠血清中ICAM-1和IL-6水平的變化：DM組大鼠血清中ICAM-1和IL-6的表達(dá)較NC組顯著增高（P<0.05），TWP、BBR、TWP聯(lián)合BBR組大鼠血清中ICAM-1和IL-6的表達(dá)較DM組SD大鼠呈劑量依賴性降低，且以TM組、TH組、TBM組、TBH組降低最明顯（P<0.05）。
　?。?）qPCR法檢測(cè)SD大鼠腎組織

8、JAK2、STAT3、SOCS1、ICAM-1和IL-6的mRNA表達(dá)量：DM組大鼠腎臟SOCS1、ICAM-1和IL-6 mRNA表達(dá)較NC組明顯升高（P<0.05），TWP、BBR、TWP聯(lián)合BBR組SD大鼠腎組織ICAM-1和IL-6 mRNA表達(dá)較DM組呈劑量依賴性降低，但SOCS1表達(dá)量在藥物干預(yù)后呈劑量依賴性上升（P<0.05），JAK2及STAT3的表達(dá)量在各組之間無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　（5）Wes

9、tern Blotting法檢測(cè)大鼠腎組織p-JAK2、p-STAT3、IL-6、ICAM-1和SOCS1的蛋白表達(dá)：DM組大鼠腎組織p-JAK2、p-STAT3 IL-6、ICAM-1和SOCS1的蛋白表達(dá)量較NC組明顯升高（P<0.05），TWP組、BBR組、TWP聯(lián)合BBR組大鼠腎臟p-JAK2、p-STAT3、IL-6和ICAM-1蛋白表達(dá)較DM組呈劑量依賴性降低， SOCS1在各藥物干預(yù)后，隨著藥物劑量的提高而增高（P<0.0

10、5）。
　?。?）免疫組化法染色觀察大鼠腎臟ICAM-1和IL-6蛋白表達(dá)定位及半定量分析：DM組大鼠腎臟腎小球和腎小球細(xì)胞間質(zhì)中可見(jiàn)大量 ICAM-1和 IL-6的表達(dá)，即大量棕黃色顆粒物的沉積，在腎小管也可以見(jiàn)到其表達(dá)，黃染顆粒較NC組明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），單用TWP組、BBR組、TWP聯(lián)合BBR組大鼠腎臟ICAM-1和IL-6蛋白表達(dá)較DM組有不同程度減少，即棕黃色顆粒物及DM組明顯減少，且呈劑量依賴

11、性（P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.2型糖尿病大鼠腎組織中JAK/STAT信號(hào)通路的激活可以使下游炎癥因子ICAM-1和IL-6的表達(dá)增多，進(jìn)而導(dǎo)致糖尿病大鼠腎臟的損傷。
　　2.雷公藤多苷聯(lián)合小檗堿可以延緩2型糖尿病大鼠蛋白尿的進(jìn)程，且呈劑量依賴性。
　　3.雷公藤多苷聯(lián)合小檗堿能夠抑制2型糖尿病大鼠腎組織JAK/STAT信號(hào)通路的激活，增高SOCS1的過(guò)表達(dá)，進(jìn)而減少ICAM-1和IL-6炎癥因子的表達(dá)