小檗堿對(duì)糖尿病大鼠血管神經(jīng)功能損傷的作用.pdf

1、目的：研究小檗堿對(duì)糖尿病早期大鼠血管神經(jīng)病變的改善作用。
　　方法：鏈脲佐菌素（STZ，55 mg·kg-1）腹腔注射誘導(dǎo)制備糖尿病大鼠模型，動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和小檗堿給藥組，72 h后尾靜脈取血監(jiān)測(cè)血糖值，大于16.7 mmol·L-1視為誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型成功。給藥組造模兩周后每天灌胃給予200 mg·kg-1小檗堿，持續(xù)2周。采用HE染色法觀察各組大鼠腸系膜血管形態(tài)學(xué)變化；運(yùn)用電場(chǎng)刺激誘發(fā)神經(jīng)源性收縮反應(yīng)的離體血管平

2、滑肌張力分析方法，觀察糖尿病大鼠腸系膜上動(dòng)脈、髂總動(dòng)脈氮能神經(jīng)和腎上腺素能神經(jīng)功能的改變,以及小檗堿給藥對(duì)血管神經(jīng)功能損傷的改善作用；同時(shí)測(cè)量電場(chǎng)刺激誘發(fā)兩種動(dòng)脈氮能神經(jīng)遞質(zhì)一氧化氮及腎上腺素能神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素釋放量的改變。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠體重、血糖及腸系膜血管外觀的變化
　　1.1.大鼠體重、血糖值的變化
　　與同期對(duì)照組大鼠相比，模型組、小檗堿給藥組大鼠的體重明顯低于對(duì)照組大鼠體重（P<0.

3、01）；與模型組大鼠相比，小檗堿給藥組大鼠的體重?zé)o明顯差異（P>0.05）。與同期對(duì)照組大鼠相比，模型組、小檗堿給藥組大鼠的血糖值明顯升高（P<0.01）；與模型組大鼠相比，小檗堿給藥組大鼠的血糖值無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　1.2.腸系膜血管的外觀變化
　　新鮮取材腸系膜血管內(nèi)淤血少，周圍脂肪組織飽滿；模型組血管內(nèi)淤血嚴(yán)重，脂肪減少；小檗堿給藥組淤血較模型組有所減輕。
　　2.大鼠離體腸系膜上動(dòng)脈、髂總動(dòng)脈神經(jīng)

4、源性收縮反應(yīng)的觀察
　　2.1.電場(chǎng)刺激誘發(fā)大鼠血管平滑肌收縮反應(yīng)的方法學(xué)考察
　　對(duì)照組、模型組、小檗堿給藥組大鼠離體腸系膜上動(dòng)脈及髂總動(dòng)脈血管標(biāo)本，電場(chǎng)刺激均可誘發(fā)穩(wěn)定可重現(xiàn)的頻率依賴性收縮反應(yīng)，且收縮反應(yīng)可被0.1μmol·L-1河豚毒素（TTX）阻斷。
　　2.2.各組大鼠電場(chǎng)刺激誘發(fā)血管收縮反應(yīng)的區(qū)別
　　腸系膜上動(dòng)脈中，與對(duì)照組相比，模型組的血管收縮反應(yīng)無(wú)明顯差異（P>0.05）；與模型組相比，小檗堿

5、給藥組的血管收縮反應(yīng)無(wú)明顯差異（P>0.05）。髂總動(dòng)脈中，與對(duì)照組相比，模型組血管的收縮反應(yīng)性顯著增強(qiáng)（P<0.05）；與模型組相比，小檗堿給藥組的血管收縮反應(yīng)無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　2.3.α-受體阻斷劑對(duì)電場(chǎng)刺激誘發(fā)大鼠離體血管反應(yīng)的影響
　　1μmol·L-1酚妥拉明給藥前后電場(chǎng)刺激引起收縮反應(yīng)的差值反應(yīng)腎上腺素能神經(jīng)功能，腸系膜上動(dòng)脈三組間無(wú)顯著性差異（P>0.05）；髂總動(dòng)脈模型組收縮反應(yīng)的差值顯著增大

6、（P<0.01），模型組與小檗堿給藥組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　2.4.一氧化氮合酶抑制劑對(duì)電場(chǎng)刺激誘發(fā)大鼠離體血管反應(yīng)的影響
　　0.1 mmol·L-1 N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）給藥前后電場(chǎng)刺激引起腸系膜上動(dòng)脈收縮反應(yīng)的差值反映氮能神經(jīng)功能，與對(duì)照組相比，模型組的差值顯著減小（P<0.01）；與模型組相比，小檗堿給藥組的差值顯著增大（P<0.05）。
　　0.1 mmol·L-17-硝基吲

7、唑（7-NI）給藥前后電場(chǎng)刺激引起腸系膜上動(dòng)脈收縮反應(yīng)的差值，與對(duì)照組相比，模型組的差值顯著減?。≒<0.05）；與模型組相比，小檗堿給藥組的差值顯著增大（P<0.05）。
　　L-NAME、7-NI給藥前后電場(chǎng)刺激引起的髂總動(dòng)脈收縮反應(yīng)的差值在三組大鼠間無(wú)顯著性差異（P>0.05, P>0.05）。
　　2.5.一氧化氮合酶抑制劑對(duì)大鼠離體血管去甲腎上腺素（NA）量效曲線的影響
　　在各組腸系膜上動(dòng)脈和髂總動(dòng)脈中，L

8、-NAME對(duì)NA收縮反應(yīng)量效曲線無(wú)顯著影響（P>0.05）；7-NI對(duì)NA收縮反應(yīng)量效曲線均有抑制作用（P<0.01）。
　　3.電場(chǎng)刺激誘發(fā)大鼠離體血管神經(jīng)遞質(zhì)釋放量的測(cè)量
　　3.1.小檗堿對(duì)糖尿病大鼠腸系膜上動(dòng)脈及髂總動(dòng)脈一氧化氮（NO）釋放量的影響
　　與對(duì)照組相比，模型組大鼠腸系膜上動(dòng)脈NO釋放量明顯降低（P<0.01）；小檗堿給藥組大鼠腸系膜上動(dòng)脈NO釋放量較模型組明顯增加（P<0.01）。
　　加入

9、7-NI或TTX后，三組大鼠腸系膜上動(dòng)脈的NO釋放量均顯著減少（P<0.01）。
　　三組大鼠髂總動(dòng)脈NO釋放量無(wú)明顯差異（P>0.05）。加入7-NI后，模型組，小檗堿給藥組大鼠NO釋放量顯著減少（P<0.05）。加入TTX后，對(duì)照組、小檗堿給藥組大鼠NO釋放量顯著減少（P<0.05）。
　　3.2.小檗堿對(duì)糖尿病大鼠腸系膜上動(dòng)脈及髂總動(dòng)脈去甲腎上腺素釋放量的影響
　　三組大鼠腸系膜上動(dòng)脈的NA釋放量無(wú)顯著性差異（P

10、>0.05）。
　　與對(duì)照組相比，模型組大鼠髂總動(dòng)脈NA釋放量明顯增加（P<0.05）；與模型組相比，小檗堿給藥組大鼠髂總動(dòng)脈NA釋放量無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　4.各組大鼠腸系膜上動(dòng)脈組織切片HE及免疫組化染色
　　各組大鼠動(dòng)脈血管HE染色明晰，彈性膜清晰可見，無(wú)明顯差異，神經(jīng)節(jié)呈圓形或橢圓形或不規(guī)則形，分布在血管周圍。以對(duì)照組HE染色作為參照，脂肪細(xì)胞飽滿，神經(jīng)節(jié)形態(tài)完整；模型組脂肪細(xì)胞皺縮，神經(jīng)節(jié)腫脹變形