不同膳食脂肪酸調節(jié)大鼠肝臟SREBP-1c基因表達影響NAFLD發(fā)生發(fā)展.pdf

1、在發(fā)達國家，NAFLD已是存在于一般人群中最普遍的肝臟疾病。據估計，它將在未來十年內成為肝移植最常見的適應癥。NAFLD可伴有中度（即脂肪變性）到重度（即脂肪性肝炎和纖維化）肝損害并影響所有年齡段人群。肥胖及其并發(fā)癥（如代謝綜合征、2型糖尿病和心血管疾病）的群體中發(fā)展成 NAFLD的風險增加。至今，尚未發(fā)現治療的有效方法，目前防治 NAFLD的主要措施仍然是通過能量限制和增加體力活動以控制體重。不幸的是，NAFLD病人治療失敗往往是因為

2、難以堅持而致。
　　有研究表明，日常膳食中不同的脂肪酸構成可能影響 NAFLD發(fā)生發(fā)展，甚至有人提出治療NAFLD的有效藥物可能是主要來源于魚油的n-3 PUFA。本課題組前期進行的 NAFLD病例對照研究發(fā)現飽和脂肪酸（主要來源于豬油）是重慶居民發(fā)生NAFLD的危險因素，而n-6 PUFA（主要來自玉米油、豆油）是保護因素。盡管病例對照研究沒有發(fā)現重慶市居民血漿n-3 PUFA水平與NAFLD患病率有關，魚油的人群干預研究的結果

3、不一致，但魚油干預對重慶市 NAFLD患者是有益的，但是其作用機制還不十分清楚。
　　SREBPs是調控與代謝脂質基因相關表達的關鍵核轉錄因子，其功能異常對NAFLD有顯著影響。課題組于肝細胞體外實驗中發(fā)現，不同膳食脂肪酸通過對固醇元件結合蛋白1c亞型的表達和轉錄活性等方面進行調節(jié)，使其對脂肪在肝細胞內不斷蓄積的情況產生重要影響。SREBP-1c可能是治療NAFLD的靶點。在本研究中，對大鼠喂養(yǎng)含10％豬油的飼料用于創(chuàng)建NAFLD

4、模型，探討不同構成的膳食脂肪酸對大鼠的脂質代謝產生的影響，對大鼠 NAFLD發(fā)生和發(fā)展的影響及其與固醇元件結合蛋白1c亞型的關系，為NAFLD的防治提供理論依據。
　　140只SD大鼠，按所需量，隨機數據表法分為5組：NAFLD模型組（n=60）、對照組（n=20）、MUFA組（n=20）、n-6 PUFA組（n=20）和4:1 n-6/n-3 PUFA組（n=20）。完成分組后的日常喂養(yǎng)情況描述如下：（此處表格省略）
　　

5、每組10只大鼠每周稱重一次，第8周時，實施安樂死。按照實驗設計分析取出對應部位的肝臟和血液，獲取后續(xù)研究的相關數據。又將另外50只NAFLD模型組大鼠隨機分成5組，分組情況與上述相同，每組10只大鼠。繼續(xù)喂養(yǎng)8周后，剩余大鼠稱重，實施安樂死。按照實驗設計分析取出對應部位的肝臟和血液，獲取后續(xù)研究的相關數據。采用 HE染色肝組織切片，觀察并半定量分析肝臟細胞的脂肪病理學變化的程度。測定各組大鼠肝臟和血清中脂質含量。選用實時定量聚合酶鏈式反

6、應法、蛋白質免疫印跡法檢測SREBP-1c和脂肪酸合成酶的蛋白及mRNA表達。
　　總結本實驗的主要結論如下：
　　1.不同膳食脂肪酸對大鼠體質量的影響。不同膳食脂肪酸飼養(yǎng)8周或16周，就體質量的增長而言，NAFLD模型組顯著高于對照組和其它膳食脂肪酸組。除NAFLD模型組以外，其余各組間體質量無差異。NAFLD建模成功的大鼠換成其它脂肪酸繼續(xù)飼養(yǎng)8周，各組大鼠體質量均無統(tǒng)計學差異。
　　2.不同膳食脂肪酸對大鼠脂代謝

7、的影響。與對照組相比，NAFLD組大鼠血清和肝臟中的總膽固醇和甘油三酯顯著增加，與NAFLD組比較，富含PUFA各組大鼠血清和肝臟TC、TG顯著降低，差異均有統(tǒng)計學意義。NAFLD建模成功的大鼠換成其它脂肪酸繼續(xù)飼養(yǎng)8周后，各組大鼠血清TC無明顯差異。模型變4:1 n-6/n-3 PUFA組大鼠血清TG、肝臟TC含量明顯低于模型組，其余各組血清TG、肝臟TC差異不明顯。就肝臟TG含量而言，與模型組相比，模型變對照組、模型變 n-6PUF

8、A組、模型變4:1 n-6/n-3PUFA組均顯著降低。
　　3.不同膳食脂肪酸對大鼠NAFLD發(fā)生發(fā)展的影響。NAFLD模型組用含10%豬油的飼料喂養(yǎng)大鼠，8周后，在光鏡下發(fā)現了大鼠肝臟細胞沉積有大量的脂肪滴，表明已成功構建其活體動物模型。為了對不同膳食脂肪酸是否有預防NAFLD發(fā)生效果進行評價，含10%橄欖油、10%玉米油、8%玉米油+2%魚油的飼料飼養(yǎng)大鼠8周，發(fā)現富含PUFA的油脂喂養(yǎng)大鼠后肝臟脂肪變性的程度較輕，尤其是4

9、:1 n-6/n-3 PUFA組大鼠肝臟脂肪沉積最少。NAS與HE結果基本一致。繼續(xù)喂養(yǎng)至16周，各組大鼠肝臟病理變化的趨勢與8周時基本相同。
　　為了進一步評價n-3 PUFA對NAFLD發(fā)展的治療作用，實驗設計把建模成功的剩余大鼠按之前的分組方法再分為5組，用不同飼料繼續(xù)喂養(yǎng)8周后，模型變對照組肝內出現大量的變性脂肪細胞，明顯的 HB、小葉內炎癥和嚴重纖維化。而模型變對照組，特別是模型變4:1 n-6/n-3 PUFA組的肝細

10、胞脂肪變性程度減輕，小葉內炎癥明顯改善。說明膳食中添加n-3 PUFA干預或者轉變?yōu)榈椭攀常瑢Ω纳芅AFLD均有積極意義。
　　4.不同膳食脂肪酸對大鼠SREBP-1c和FAS基因表達的影響。NAFLD組大鼠肝臟固醇元件結合蛋白1c亞型、脂肪酸合成酶的蛋白表達水平與對照組相比，NAFLD組表達顯著增加，mRNA表達水平也增加，且兩基因趨勢一致。與模型組相比，富含多不飽和脂肪酸的4:1n-6/n-3和n-6組，這兩組肝臟固醇元件結

11、合蛋白1c亞型、脂肪酸合成酶的 mRNA和蛋白表達水平，顯著下降。說明膳食中的飽和脂肪酸上調大鼠肝臟SREBP-1c、FAS的基因表達，而在高脂膳食情況下，PUFA尤其是n-3 PUFA可以下調大鼠肝臟SREBP-1c、FAS的基因表達。
　　上述結果提示，高脂膳食尤其是高飽和脂肪酸膳食顯著上調大鼠肝臟 SREBP-1c和FAS基因表達，促進肝臟脂肪合成。誘導NAFLD的發(fā)生發(fā)展，而低脂膳食或富含PUFA尤其是n-3 PUFA的膳