STZ大鼠心肌脂肪酸氧化相關(guān)酶基因mRNA表達(dá)的變化.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)用STZ破壞大鼠胰島的β細(xì)胞，建立實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠模型，動(dòng)態(tài)觀察該狀態(tài)下心肌細(xì)胞線粒體、過(guò)氧化物酶體中ACOX1、ACOX2、M-CPT I、DBP、LBP的表達(dá)情況；另外，用PPAR<,α>激動(dòng)劑非諾貝特激活PPAR<,α>，觀察正常大鼠和糖尿病大鼠心肌PPAR<,α>下游基因與脂肪酸氧化相關(guān)酶的基因表達(dá)變化，為探討糖尿病心肌脂代謝紊亂的發(fā)生機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1、動(dòng)物分組及取材 將雄性Wi

2、star大鼠(體重200-250g)隨機(jī)分為正常對(duì)照組(C)和糖尿病組(D)。禁食12h后，糖尿病組大鼠一次性腹腔注射2％STZ(STZ臨用前用0.1M，pH4.5檸檬酸鈉緩沖液配制)65mg/kg，注射后72h，空腹血糖濃度大于16.7mmol/L的大鼠定為糖尿病大鼠；正常對(duì)照組大鼠腹腔注射等量檸檬酸鈉緩沖液。一部分正常大鼠、糖尿病大鼠分別在成功造模后6周末、12周末給予實(shí)驗(yàn)處理，作為正常對(duì)照6周組(C6)、糖尿病大鼠6周組(D6)和

3、正常對(duì)照12周組(C12)、糖尿病大鼠12周組(D12)；另一部分正常大鼠、糖尿病大鼠在成功造模后4周末給予PPARa激動(dòng)劑非諾貝特(用生理鹽水溶解)100mg/kg/day灌胃，連續(xù)兩周，于6周末給予實(shí)驗(yàn)處理，作為正常對(duì)照6周+非諾貝特組(C6+F)和糖尿病大鼠6周+非諾貝特組(D6+F)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理前禁食12h，次日腹腔內(nèi)注射10％水合氯醛(0.37g/kg)進(jìn)行麻醉，頸動(dòng)脈插管取血，分離血清用于血糖、血甘油三酯的測(cè)定；打開(kāi)胸腔，

4、迅速取出心臟，剪去血管和心臟周圍結(jié)締組織，用4℃預(yù)冷生理鹽水沖洗，濾紙吸干，取5×5x5ram<'3>左室心肌組織，固定于4％多聚甲醛溶液中，用于光鏡檢測(cè)；其余組織立即置于液氮中，然后于-70℃保存，用于總RNA的提取。 2、血糖、血甘油三酯的測(cè)定 應(yīng)用日本生產(chǎn)的Olympus AU600型全自動(dòng)生化分析儀，氧化酶法測(cè)定血糖、血甘油三酯。 3、心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè) 取部分左心室組織，固定于4％多聚甲醛溶液中

5、，石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡觀察心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。 4、mRNA表達(dá)的測(cè)定 用Trizol法提取心肌組織總RNA.以GAPDH作為內(nèi)參照，RT-PCR．法測(cè)定心肌ACOX1、ACOX2、M-CPT I、DBP、LBP mRNA的相對(duì)表達(dá)量。 5、數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)均用x+S表示，采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，組間比較用單因素方差分析檢驗(yàn)，檢驗(yàn)以P<0.05為差異有顯著性意義。