LXRα、SREBP-1c介導(dǎo)脂肪酸代謝紊亂在大鼠NAFLD形成中的作用及機(jī)制.pdf

1、隨著生活方式的改變，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)已成為許多發(fā)達(dá)和發(fā)展中國家日益增多的疾病，在我國的發(fā)病率也逐漸上升。NAFLD的發(fā)病機(jī)制至今尚未闡明，既往研究表明機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂是NAFLD發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，而肝臟是機(jī)體脂質(zhì)代謝中心器官，其脂質(zhì)代謝的調(diào)控機(jī)理十分復(fù)雜。近年來研究發(fā)現(xiàn)，肝X受體α(LXRα)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(SREBP-1c)是調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝的重要核轉(zhuǎn)錄因子，是脂肪酸代謝中的關(guān)鍵調(diào)控點。因此，研究LXR

2、α和SREBP-1c在NAFLD形成中的作用有助于我們更全面的認(rèn)識NAFLD的發(fā)病機(jī)制。 本研究利用高脂飲食誘導(dǎo)大鼠NAFLD模型，設(shè)立對照組(C組)和NAFLD組(F組)，分別給予基礎(chǔ)飼料和高脂飼料。觀察肝臟大體形態(tài)、肝組織病理學(xué)改變；測定血清FFA、TG、ALT和AST含量；免疫組化染色(IHC)觀察SREBP-1c的蛋白表達(dá)；RT-PCR檢測LXRα、SREBP-1cmRNA的表達(dá)；Western-blot檢測LXRα、S

3、REBP-1c蛋白表達(dá)；紫外分光光度計測定肝組織脂肪酸合成酶(FAS)活性變化。從脂肪酸代謝紊亂與NAFLD的形成、SREBP-1c調(diào)節(jié)脂肪酸合成、LXRα調(diào)控SREBP-1c轉(zhuǎn)錄參與NAFLD的發(fā)生三方面，探討了LXRα、SREBP-1c介導(dǎo)脂肪酸代謝紊亂在NAFLD形成過程中的作用和可能機(jī)制。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 1、脂肪酸代謝紊亂與NAFLD 建立高脂飲食誘導(dǎo)大鼠NAFLD模型后，肉眼觀察肝臟大體形態(tài)，HE染色

4、觀察肝組織病理改變、檢測血清FFA、TG、ALT和AST含量。結(jié)果顯示C組大鼠肝臟大體形態(tài)正常，病理、血清學(xué)指標(biāo)無異常。高脂喂養(yǎng)2周后，病理、血清學(xué)指標(biāo)未見明顯改變，提示機(jī)體自身存在一個自我調(diào)節(jié)的過程。4、8、12周時病理分別呈2、3、4度的脂肪肝，同時在12周出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤及細(xì)胞壞死，此時已發(fā)生了脂肪性肝炎，且肝臟體積明顯增大、色澤變黃、切面油膩；測定血清TG、FFA含量發(fā)現(xiàn)4周時開始升高(P＜0.01)，血清ALT、AST在8周時開

5、始升高。我們推測高脂飲食可引起FFA升高，脂肪酸代謝紊亂，肝細(xì)胞脂肪變性，當(dāng)FFA升高到一定程度時將導(dǎo)致NASH的發(fā)生。 2、SREBP-1c參與調(diào)節(jié)脂肪酸的合成與NAFLD發(fā)生關(guān)系密切 利用RT-PCR和Western-blot法觀察SREBP-1cmRNA和蛋白表達(dá)變化，紫外分光光度儀測定肝組織FAS活性，IHC染色觀察SREBP-1c陽性表達(dá)。結(jié)果顯示C組SREBP-1cmRNA和蛋白表達(dá)、肝組織FAS活性無明顯改

6、變，SREBP-1c陽性表達(dá)呈淺黃色顆粒散在分布于部分肝細(xì)胞胞漿中。高脂喂養(yǎng)2周后，SREBP-1c表達(dá)在基因和蛋白水平均升高，陽性細(xì)胞計數(shù)有顯著差異(P＜0.05)，但肝組織FAS活性無異常；隨時間延長，SREBP-1c表達(dá)逐漸增多，F(xiàn)AS活性也相應(yīng)增加。當(dāng)光鏡下肝組織病理無明顯改變時，SREBP-1c的基因和蛋白表達(dá)已發(fā)生了明顯變化。提示在高脂飲食誘導(dǎo)大鼠NAFLD模型中，肝組織SREBP-1c分子水平的改變先于組織學(xué)的改變，這符合

7、NAFLD形成的病理過程。由于FAS是脂肪酸合成中的關(guān)鍵酶，F(xiàn)AS的基因轉(zhuǎn)錄由SREBP-1cmRNA調(diào)控。當(dāng)SREBP-1c表達(dá)增加到一定程度，超過機(jī)體的適應(yīng)及自我調(diào)節(jié)能力時，F(xiàn)AS基因轉(zhuǎn)錄開始增加，引起FAS活性升高，脂肪酸合成增多，肝臟脂質(zhì)代謝障礙，肝細(xì)胞脂肪變性，參與了NAFLD的發(fā)生。 3、LXRα調(diào)控SREBP-1c的轉(zhuǎn)錄參與形成NAFLD 采用RT-PCR和Western-blot法檢測LXRαmRNA和蛋

8、白表達(dá)，結(jié)果顯示C組間表達(dá)無差異(P＞0.05)。高脂喂養(yǎng)后，與C組比較LXRα基因和蛋白水平逐漸增加，與SREBP-1c表達(dá)趨勢、FAS活性升高趨勢和脂肪肝程度一致。提示高脂飲食可誘導(dǎo)LXRα表達(dá)增強(qiáng)，激活SREBP-1c，引起FAS活性升高，脂肪酸合成增多。此外，LXRα也可直接激活FAS的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步使FAS活性增強(qiáng)、脂肪酸合成增多，引起肝細(xì)胞脂肪變性，導(dǎo)致NAFLD。 以上研究結(jié)果顯示在NAFLD形成過程中，LXRα、S