絲氨酸棕櫚酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶與油酸誘導(dǎo)的肝星狀細胞凋亡及自噬的關(guān)系.pdf

1、目的：探討神經(jīng)酰胺從頭合成途徑及其關(guān)鍵酶絲氨酸棕櫚酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶（serine palmitoyltransferase,SPT）與油酸誘導(dǎo)的肝星狀細胞凋亡及自噬的關(guān)系。
　　方法：體外培養(yǎng)HSC-T6細胞，應(yīng)用不同濃度的油酸（0umol/L、25umol/L、50umol/L、100umol/L、150umol/L）培養(yǎng)HSC-T6細胞24h,采取MTT法檢測HSC-T6細胞的增殖活力，選取能抑制細胞增殖又不致細胞死亡的三個濃度

2、作為誘導(dǎo)肝星狀細胞的最佳油酸濃度(50umol/L、100umol/L、150umol/L)，進入下一步實驗。實驗分為四組：空白對照組和三個不同濃度的油酸誘導(dǎo)組。以Real-time PCR檢測神經(jīng)酰胺從頭合成途徑關(guān)鍵酶SPT mRNA的表達，MDC染色法檢測肝星狀細胞自噬溶酶體的變化,流式細胞儀檢測HSC-T6細胞凋亡，Western blot檢測調(diào)亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax和自噬標志蛋白LC3B、Beclin-1、Atg5的表達。

3、
　　結(jié)果：
　　1.油酸誘導(dǎo)組HSC-T6細胞的抑制率明顯高于對照組（P<0.01)，且隨著油酸濃度越高，抑制率越高。
　　2.油酸誘導(dǎo)組HSC-T6細胞凋亡率明顯高于對照組（P<0.01)，且油酸濃度越高，細胞凋亡率逐漸增高。
　　3.油酸誘導(dǎo)組HSC-T6細胞自噬泡明顯多于對照組，且隨著油酸濃度的增多，HSC-T6細胞自噬泡的形成逐漸增多。
　　4.不同濃度油酸誘導(dǎo)的HSC-T6細胞中SPT mRNA

4、表達量與凋亡率之間有明顯的正相關(guān)性（r=0.963，P<0.01)。
　　5.不同濃度油酸誘導(dǎo)的HSC-T6細胞中SPT mRNA表達量與促凋亡蛋白Bax表達水平之間有顯著的正相關(guān)性（r=0.958，P<0.01)，與抗凋亡蛋白Bcl-2表達水平之間有顯著的負相關(guān)性（r=-0.971，P<0.01)。
　　6.不同濃度油酸誘導(dǎo)的HSC-T6細胞中SPT mRNA表達量與自噬標志蛋白LC3B表達水平之間有顯著的正相關(guān)性（r=0