缺氧誘導因子-1α通過自噬調(diào)控肝星狀細胞活化的機制研究.pdf

1、背景及目的:肝纖維化是多種慢性肝損傷所共有的病理學基礎(chǔ)，其主要特征是細胞外基質(zhì)過度沉積及肝星狀細胞的表型轉(zhuǎn)化和活化。越來越多的研究表明自噬與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展及其主要效應細胞肝星狀細胞的活化有關(guān)。我們前期研究結(jié)果表明缺氧誘導因子-1α（Hif-1α）對肝星狀細胞的活化發(fā)揮重要的調(diào)控作用。因此，基于以上研究背景，本課題擬探討自噬是否參與Hif-1α調(diào)控的肝星狀細胞活化，希望更加深入地探索肝纖維化的發(fā)生機制。
　　方法：以日本血吸蟲感

2、染小鼠作為肝纖維化動物模型，用免疫組織化學染色法和western blot分別檢測小鼠肝臟組織中Hif-1α靶分子VEGF、自噬標記分子LC3B及肝星狀細胞活化標記分子α-SMA、Vimentin的表達。在細胞水平上，以人肝星狀細胞系LX-2為細胞模型，給予細胞1％ O2或2μg/ml LPS處理，通過western blot的實驗方法和免疫熒光染色檢測肝星狀細胞活化標記α-SMA及自噬標記分子LC3B、Beclin-1和Atg5的表達

3、。用hif-1αsiRNA特異性干擾hif-1α，通過western blot檢測肝星狀細胞在1%O2或2μg/ml LPS刺激下自噬標記分子LC3B和Beclin-1的變化情況。最后用自噬抑制劑LY294002和氯喹抑制肝星狀細胞中自噬的發(fā)生，再檢測其活化標記分子α-SMA、Vimentin的表達。
　　結(jié)果：日本血吸蟲感染小鼠肝臟組織中自噬標記物LC3B和肝星狀細胞活化標記分子Vimentin、α-SMA及Hif-1α靶分子V

4、EGF的表達升高。用低氧或2μg/ml LPS給予肝星狀細胞不同的時間處理，檢測到肝星狀細胞自噬標記物LC3B、Beclin-1、Atg5及活化標記分子α-SMA、Vimentin的表達增加，并且觀察到細胞內(nèi)形成自噬小體樣結(jié)構(gòu)。利用hif-1αsiRNA干擾hif-1α表達，低氧或LPS誘導的自噬標記分子Beclin-1、LC3B的增加受到阻遏。利用自噬抑制劑抑制細胞自噬，低氧或LPS誘導的肝星狀細胞活化標記分子α-SMA的增加受到抑制