假微型海鏈藻中絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶的克隆、表達(dá)及與鞘脂合成的關(guān)系研究.pdf

1、硅藻是海洋生態(tài)中最重要的自養(yǎng)生物和海洋生態(tài)系統(tǒng)中能量流動(dòng)和物質(zhì)循環(huán)的基礎(chǔ)。鞘脂種類(lèi)和含量的變是鞘脂類(lèi)從頭合成途徑中的第一限速酶，在調(diào)節(jié)鞘脂代謝中起著樞紐作用，影響化對(duì)于生物體的生長(zhǎng)增殖和衰亡起到至關(guān)重要的作用。絲氨酸棕桐酰轉(zhuǎn)移酶（SPT）各種鞘脂類(lèi)成分在體內(nèi)的合成、分布及功能。
　　本研究選取已完成全基因序列測(cè)定的假微型海鏈藻，研究假微型海鏈藻中SPT的克隆、表達(dá)及與鞘脂合成的關(guān)系。首先從假微型海鏈藻的基因組中克隆并鑒定了 SPT

2、-LCB1基因片段，大小為1206 bp；在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了 SPT-LCB1-pET-28a表達(dá)載體并于E.coli BL21中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，獲得分子量為44.1 kDa的蛋白，由401個(gè)氨基酸組成，大部分以不可溶的包涵體的形式存在于大腸桿菌中；同時(shí)運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)以及 UPLC-MS分析技術(shù)，分別檢測(cè)不同培養(yǎng)條件下的假微型海鏈藻中 SPT的表達(dá)量與其鞘脂含量，結(jié)果表明假微型海鏈藻中 SPT的表達(dá)與細(xì)胞中鞘脂的合成和積累具有