拉米夫定新型手性分離體系的研究.pdf

1、利用手性選擇劑構(gòu)建手性分離環(huán)境，在分離通道內(nèi)，通過添加流動相手性選擇劑或?qū)⑵渲苽涑晒潭ㄏ鄬崿F(xiàn)手性拆分是手性分離分析常規(guī)的研究手段。論文對近年來在手性選擇劑方面的發(fā)展，特別是單一分離體系和多元分離體系方面做了簡要綜述，概括了當(dāng)前手性分離的研究進展；并對拉米夫定的研究現(xiàn)狀做了簡要概述，論文著重針對拉米夫定手性分離體系鮮見報道的現(xiàn)狀構(gòu)建了新方法。
　　拉米夫定是目前使用較為廣泛的胞嘧啶核苷類抗病毒藥物，已經(jīng)應(yīng)用到抗乙型肝炎病毒（HBV）

2、和抗艾滋病病毒（HIV）的治療上。臨床以左旋體給藥，右旋體存在較大的細胞毒性。建立有效的手性拆分體系，對于檢測或純化有效成分應(yīng)具有學(xué)術(shù)價值及實際應(yīng)用前景。論文以有自主知識產(chǎn)權(quán)的三種β-環(huán)糊精衍生物（其中1種獲國家專利授權(quán)）為手性選擇劑，以高效毛細管電泳法（HPCE）和高效液相色譜法（HPLC）為分析手段，構(gòu)建拉米夫定對映體或非對映體混合物的手性分離環(huán)境，以期實現(xiàn)手性拆分。
　　本課題分別將雙-（6-氧-間羧基苯磺?；?β-環(huán)糊精

3、（β-CD-M1）、雙-（6-氧-間硝基苯磺?；?β-環(huán)糊精（β-CD-N2）和雙-[6-氧（3-脫氧檸檬酸單酯-4）]-β-環(huán)糊精（β-CD-B2）作為手性選擇劑，在75μm毛細管柱內(nèi)構(gòu)建手性環(huán)境，制備成HPCE手性整體柱。為驗證其柱內(nèi)鍵合情況，通過場發(fā)射掃描電鏡（SEM）對其內(nèi)部形貌進行考察。分別用β-CD-M1、β-CD-N2和β-CD-B2手性柱，在HPCE中對拉米夫定對映體混合物 A進行手性拆分。通過分離條件優(yōu)化，分離原理討

4、論，分別建立了拉米夫定對映體混合物A在三種手性選擇劑中的分離方法。其中在β-CD-M1HPCE手性柱中的最佳分離條件為：50mmol/L Tris-磷酸緩沖液pH5.1、分離電壓18kV、檢測波長270nm、分析時間10min，分離度RS達12.87；在β-CD-N2HPCE手性柱中的最佳分離條件為：背景緩沖液為50mmol/L Tris-磷酸緩沖液 pH4.1、分離電壓-23kV、檢測波長270nm、分析時間20min，分離度RS達5

5、5.95；在β-CD-B2HPCE手性柱中當(dāng)背景緩沖液為50mmol/L Tris-磷酸緩沖液pH2.8，工作電壓為-23kV，檢測波長270nm時，分離度RS達48.35。比較實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，拉米夫定對映體混合物A在三種手性選擇劑體系中都獲得手性拆分，β-CD-B2柱材料的耐酸性較強；在β-CD-M1手性HPCE整體柱中線性范圍較β-CD-N2手性HPCE整體柱窄；由SEM結(jié)果顯示β-CD-M1柱內(nèi)材料鍵合結(jié)構(gòu)既有致密層，也有稍大的網(wǎng)狀

6、孔結(jié)構(gòu)，且柱內(nèi)微孔結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定，流動相滲透性好，β-CD-N2手性整體柱內(nèi)材料鍵合情況不夠致密，存在較大空隙，且穩(wěn)定性劣于β-CD-M1手性整體柱，在某些特定介質(zhì)中使用一段時間致密鍵合材料會出現(xiàn)脫落現(xiàn)象。
　　為克服兩種柱材料各自存在的局限性，將兩種手性選擇劑以一定比例混合制備成HPCE手性整體柱，期望取長補短優(yōu)化其分離效能。將一定量的β-CD-M1、β-CD-N2以一定比例混合作為主要功能單體，分別與適量次功能單體、交聯(lián)劑、致孔

7、劑及引發(fā)劑等超聲混合后填入毛細管柱內(nèi)，恒溫加熱引發(fā)原位聚合反應(yīng)，制備混合材料HPCE手性整體柱，用SEM手段表征其柱內(nèi)鍵合情況，結(jié)果顯示，選擇β-CD-M1：β-CD-N2=1：2為最佳混合比例，SEM結(jié)果顯示這種混合HPCE整體柱克服了單一選擇劑β-CD-N2柱材料不穩(wěn)定的弊端，并將拉米夫定混合物和布比卡因?qū)τ丑w作為分析對象，驗證其分離能力。初步結(jié)果表明，在工作電壓18kV、50mmol/L Tris-磷酸緩沖液pH4.8～5.2的分

8、離體系中，拉米夫定非對映體混合物B得到拆分，最大分離度RS達13.20；在pH4.0～5.0的范圍內(nèi)，布比卡因?qū)τ丑w有拆分跡象。
　　為進一步建立拉米夫定混合物手性純化體系，用β-CD-B2為手性固定相，在HPLC中構(gòu)建手性分離環(huán)境，拉米夫定對映體混合物A得到了手性拆分。最佳分離條件為5mmol/L檸檬酸-三乙胺pH4.0為緩沖液，乙腈為有機添加劑，V緩沖液：V乙腈=45％：55%，流速0.80mL/min，檢測波長270nm，柱

9、溫20℃，分離度RS達3.97。分別以β-CD-M1和β-CD-N2兩者為手性選擇劑構(gòu)建的手性HPLC柱中，用同樣的流動相，均未達到拆分拉米夫定對映體混合物A的結(jié)果。而在 HPCE中可分別拆分拉米夫定對映體混合物A的β-CD-M1和β-CD-N2兩種手性選擇劑在HPLC中對拉米夫定對映體混合物A基本無拆分能力。說明在同一流動相環(huán)境中，HPLC中手性選擇劑β-CD-B2羧基含量高可使拉米夫定兩對映體與固定相的結(jié)合力差異加大，沒有苯環(huán)大π鍵

10、的作用也不影響其拆分能力。
　　論文探究了普羅帕酮手性藥物在β-CD-N2手性HPCE整體柱中的分離情況，得到其最佳分離條件為40mmol/LTris-磷酸緩沖液pH4.0，工作電壓-25kV，檢測波長254nm，分析時間15min，分離度RS達52.82。對其分離機理進行了初步討論：衍生化的β-CD-N2中苯環(huán)與普羅帕酮中的苯環(huán)產(chǎn)生π-π共軛作用，硝基、磺?；鶊F與對映異構(gòu)體的協(xié)同作用，增強了β-CD-N2衍生物與普羅帕酮兩對映異