維藥榅桲提取物對改善胰島素抵抗作用和機理的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用榅桲提取物和3T3-L1前脂肪細胞株，探討3T3-L1脂肪細胞的增殖以及榅桲提取物對改善胰島素抵抗藥理作用和機制。
　　方法：將3T3-L1細胞分組后，對照組加正常培養(yǎng)液，模型組中加入不同濃度的榅桲提取物，分別在24,42,72h,96h時，使用MTT檢測細胞增殖情況；誘導(dǎo)分化后進行葡萄糖消耗量測定且用油紅O染色和TG含量測定來鑒別誘導(dǎo)是否成功；對分化好的細胞進行分組處理，加地塞米松誘導(dǎo)胰島素抵抗，取上清液，以培養(yǎng)基中的

2、葡萄糖消耗量反映胰島素抵抗程度，葡萄糖含量用葡萄糖檢測試劑盒測定；比較正常對照，模型組，陽性藥物組，及榅桲提取物（低，中，高）組，使用葡萄糖測定試劑盒檢測培養(yǎng)基中葡萄糖的消耗量和FFA含量；使用PCR法檢測GLUT4和IRS的表達。
　　結(jié)果：與對照組比較，50μg/ml，200μg/ml，400μg/ml的生物堿和多糖能明顯抑制細胞增殖，濃度越高，抑制作用越明顯。榅桲總黃酮的抑制率與對照組相比較，作用并不明顯；經(jīng)過TG含量測定發(fā)

3、現(xiàn)，與對照組相比，成熟的3T3-L1細胞中脂質(zhì)含量增多，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。結(jié)合油紅O染色可以判定前脂肪細胞成功的誘導(dǎo)成成熟的脂肪細胞。通過葡萄糖試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)模型組中的葡萄糖的利用率減少，尤其在48h中，可以鑒定胰島素抵抗模型成立。3T3-L1細胞中加入榅桲生物堿和榅桲多糖后，可以明顯改善3T3-L1細胞胰島素抵抗模型的葡萄糖利用率，與對照相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與對照組相比，模型組細胞內(nèi)的游離脂肪酸

4、明顯高于正常對照組，表明形成胰島素抵抗模型的同時FFA水平也上升。羅格列酮組與模型組相比，其細胞內(nèi)的FFA水平明顯下降。同時，榅桲有效提取物生物堿和多糖均能夠有效抑制細胞內(nèi)游離脂肪酸的合成。誘導(dǎo)分化之后的3T3-L1細胞中的脂肪含量明顯提高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）羅格列酮和榅桲提取物生物堿和多糖能夠改善胰島素抵抗細胞內(nèi)Glut4和IRS-1基因表達。
　　結(jié)論：確定了最佳的細胞鋪板密度和榅桲3個提取物對3T3-L1脂肪