老年性耳聾患者與健康老年人耳道菌群對比分析的研究.pdf

1、目的：
　　研究聽力正常老年人與老年性耳聾患者耳道微生態(tài)系菌群生物量與生物多樣性，探索耳道微生態(tài)系菌群構(gòu)成，為深入研究各個微生態(tài)細菌群協(xié)同作用打下堅實的基礎(chǔ)，也為臨床耳道感染的防治和指導(dǎo)抗生素精準使用提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.選擇2015年1月到2016年1月于大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院耳鼻喉頭頸外科門診就診的人群29例，分為二組，老年性耳聾組（耳聾組）和聽力正常組（對照組）。耳聾組患者13例，對照組患者16例。二

2、組患者就診前的3個月各有2例有抗生素使用史，分別為阿米卡星、阿奇霉素、頭孢菌素（劑量和出廠商不詳），其余沒有。
　　2.采用傳統(tǒng)稀釋滴定培養(yǎng)法、PCR-DGGE法檢測聽力正常老年人和老年性耳聾患者耳道微生態(tài)系菌群的生物量和多樣性。
　　3.采用分區(qū)劃線分離培養(yǎng)、全自動微生物鑒定與藥敏系統(tǒng)，對老年人耳道微生態(tài)系菌群進行藥物敏感實驗。
　　結(jié)果:
　　1.老年人耳道微生態(tài)系菌群生物量
　　結(jié)果顯示，經(jīng)傳統(tǒng)稀釋滴

3、定培養(yǎng),計數(shù)106稀釋倍數(shù)下，耳聾組菌落數(shù)為71.5±10.73 CFU/g，正常對照組菌落數(shù)為72.83±6.24 CFU/g，兩組比較，耳聾組與正常對照組菌落數(shù)無顯著差異(P>0.05)；即耳聾組與正常對照組菌落數(shù)生物量一致。
　　2.老年人耳道微生態(tài)系菌群需氧和厭氧培養(yǎng)菌落數(shù)
　　結(jié)果顯示，耳聾組需氧培養(yǎng)菌落數(shù)為77.67±8.50 CFU/g，厭氧培養(yǎng)菌落數(shù)為65.33±10.7 CFU/g；對照組需氧培養(yǎng)菌落數(shù)為7

4、1.67±3.06 CFU/g，厭氧培養(yǎng)菌落數(shù)為74.00±9.17 CFU/g，兩組比較，沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；即耳聾組需氧培養(yǎng)菌落數(shù)與對照組需氧培養(yǎng)菌落數(shù)一致，耳聾組厭氧培養(yǎng)菌落數(shù)與對照組厭氧培養(yǎng)菌落數(shù)一致，說明兩組的菌群分布基本一致。
　　3.老年人耳道微生態(tài)系菌群形態(tài)
　　樣品經(jīng)培養(yǎng)24h和48h后，觀察CBA平板的菌落形態(tài)，耳聾組需氧培養(yǎng)可見圓形凸起，邊緣整齊，白色，無溶血環(huán)的菌落；耳聾組厭氧培養(yǎng)可見圓形

5、凸起，表面光滑，淡黃色，菌落周圍有全透明溶血環(huán)的菌落和白色，無溶血環(huán)的菌落；正常對照組需氧培養(yǎng)可見圓形凸起,邊緣整齊，表面光滑，濕潤，白色菌落；正常對照組厭氧培養(yǎng)可見圓形凸起,邊緣整齊，表面光滑，濕潤，白色菌落。挑取菌落，經(jīng)革蘭染色，顯微鏡下觀察，可見耳聾組需氧細菌形態(tài)為革蘭陽性、矛頭狀成對排列、短鏈狀排列、無芽孢、無莢膜；耳聾組厭氧細菌形態(tài)為革蘭陽性、葡萄狀排列、無芽孢、無莢膜；正常對照組需氧細菌形態(tài)為革蘭氏陽性，矛頭狀成對排列、短鏈

6、狀排列、無芽孢、無莢膜；正常對照組厭氧細菌形態(tài)為革蘭陽性、葡萄狀排列無芽孢、無莢膜。
　　4.老年人耳道微生態(tài)系菌群核酸DNA總量變化
　　結(jié)果顯示，經(jīng)QIAampDNA Stool Mini kit提取，分光光度計檢測，計算后，可見耳聾組總核酸DNA為281.50±26.60（mg/mL），正常對照組總核酸DNA為366.50±28.62（mg/mL），兩組比較，差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），耳聾組總核酸DNA

7、量低，正常對照組核酸DNA總量高，說明耳聾患者的微生態(tài)菌群的數(shù)量少。
　　5.老年人耳道微生態(tài)系菌群PCR-DGGE電泳與聚類分析結(jié)果
　　結(jié)果顯示，二組耳道微生態(tài)系菌群的PCR-DGGE電泳圖譜可見，耳聾組患者的優(yōu)勢條帶為28.46±2.76條；正常對照組的優(yōu)勢條帶為29.88±2.96條，兩組比較，優(yōu)勢條帶數(shù)沒有差別（P>0.05），但是其條帶的明暗程度不同，說明在二組同一細菌的含量有差別。
　　6.老年人耳道微生

8、態(tài)系菌群多樣性分析
　　結(jié)果顯示，利用Quantity One軟件對耳聾組與對照組耳道菌群樣本PCR-DGGE圖譜進行UPGMA樹狀圖聚類分析，從二組耳道微生態(tài)系菌群的PCR-DGGE電泳圖譜的凝膠聚類分析可見，耳聾組與正常對照組微生態(tài)菌群聚為一類，說明兩組的微生態(tài)菌群的多樣性是一致的。
　　7.老年人耳道微生態(tài)系菌群特異性條帶測序結(jié)果
　　結(jié)果顯示，利用測序方法，對老年人耳道微生態(tài)系菌群檢測可見：表皮葡萄球菌、山羊葡

9、萄球菌、里昂葡萄球菌、類白喉棒狀桿菌、dentisani鏈球菌、argensis葡萄球菌、痤瘡丙酸桿菌和tengchongensis棲熱菌。
　　8.兩組所分離培養(yǎng)的菌落進行自動鑒定和藥敏實驗結(jié)果
　　結(jié)果顯示，對老年人耳道微生態(tài)系菌群發(fā)現(xiàn)：兩組所分離的菌落藥敏實驗結(jié)果表明，糞腸球菌對青霉素、氨芐西林敏感，對氨基糖苷類抗生素耐藥，對萬古霉素敏感；金黃色葡萄球（耐甲氧西林菌株MRSA）菌對青霉素、慶大霉素、紅霉素、四環(huán)素耐藥，

10、對克林霉素、利福霉素耐藥，對萬古霉素、呋喃妥因和替考拉明敏感；表皮葡萄球菌對青霉素、紅霉素、復(fù)方新諾明耐藥，萬古霉素、利奈唑胺敏感；肺炎鏈球菌對紅霉素、阿奇霉素、對克林霉素耐藥、四環(huán)素、復(fù)方新諾明耐藥，對萬古霉素、利奈唑胺敏感。
　　結(jié)論:
　　1.老年性耳聾患者與聽力正常老年人耳道微生態(tài)系菌群需氧和厭氧的種類沒有明顯改變，耳聾組與正常對照組菌落數(shù)生物量一致，耳聾組總核酸DNA量低，正常對照組核酸DNA總量高，耳聾患者的微生