NNMT在鎳誘導的BEAs-2B細胞組蛋白H3甲基化中的作用研究.pdf

1、背景：
　　鎳化合物在工業(yè)生產(chǎn)中的廣泛應用不可避免地會造成職業(yè)人群的健康危害。流行病學研究表明，與在非鎳暴露的場所中的工作人員相比，鎳礦工人中因患肺癌的死亡率明顯增高，鎳的化合物已經(jīng)被國際癌癥研究中心(IARC)正式確立為一類致癌物。近來的研究表明，組蛋白甲基化參與了鎳誘導肺癌的早期階段。尼克酰胺-N-甲基轉移酶(NNMT)與癌細胞的增殖、遷移等生物學特征密切相關，研究發(fā)現(xiàn)NNMT可以減少細胞內(nèi)腺苷甲硫氨酸/腺苷同型半胱氨酸(SA

2、M/SAH)比值導致組蛋白甲基化水平降低。而目前，尚未見文獻報道鎳暴露能通過影響NNMT的表達進而誘導組蛋白甲基化。本課題主要研究NNMT是否參與了鎳引起的組蛋白甲基化，并初步探討鎳引NAD/NADH比值改變在鎳導致的NNMT表達抑制以及H3K9me2水平升高中的作用，為闡明鎳引起組蛋白甲基化的機制提供新的線索。
　　內(nèi)容：
　　①將支氣管上皮細胞(BEAS-2B)暴露于不同濃度的氯化鎳(NiCl2)72h以及在200μM

3、NiCl2處理0h、12h、24h、48h和72h。采用CCK-8試劑盒檢測氯化鎳暴露后BEAS-2B細胞活性的變化。用Western blot檢測氯化鎳暴露后，組蛋白H3第9位賴氨酸單甲基化(H3K9me1)、雙甲基化(H3K9me2)和三甲基化(H3K9me3)以及NNMT蛋白的表達水平，RT-PCR用于檢測H3K9me2下游的肺癌抑癌基因MAP2K3和DKK1以及NNMT mRNA的表達水平。
　?、诓捎眉毎D染的方法使BE

4、AS-2B細胞過表達NNMT，觀察NNMT過表達后，經(jīng)氯化鎳處理后的細胞中H3K9me2及其下游抑癌基因MAP2K3和DKK1的表達變化，用HPLC檢測細胞中SAM/SAH比值的變化。
　　③用NADH氧化劑檸嗪酸(phenazine methosulfate，PMS)處理經(jīng)氯化鎳暴露后的細胞，檢測細胞內(nèi)NAD/NADH比值的變化，用Western blot和RT-PCR檢測NNMT、H3K9me2及其下游抑癌基因MAP2K3和D

5、KK1的表達變化。
　　結果：
　?、俾然囈鸾M蛋白H3第9位賴氨酸甲基化中H3K9me2水平增加，并下調(diào)其下游抑癌基因MAP2K3和DKK1的表達。
　　②氯化鎳抑制BEAS-2B細胞中NNMT的表達，NNMT可以通過降低細胞內(nèi)SAM/SAH比值參與鎳引起的H3K9me2升高以及MAP2K3和DKK1表達水平降低。
　?、跴MS可以抑制鎳引起的H3K9me2升高以和抑癌基因MAP2K3和DKK1表達下調(diào)，但不

6、能拮抗鎳導致的BEAS-2B細胞中NNMT的表達抑制。
　　結論：
　　根據(jù)本研究的結果，得出結論:鎳導致的NNMT表達抑制參與了鎳誘導的H3K9me2水平增加，NNMT可以通過改變細胞內(nèi)SAM/SAH的比值調(diào)控鎳引起的H3K9me2升高。氯化鎳導致的NAD/NADH比值下降沒有在鎳抑制NNMT表達中起作用，但是NAD/NADH比值的改變參與了鎳導致H3K9me2水平升高這一過程。本研究為解釋鎳引起組蛋白甲基化狀態(tài)改變提供了