大鼠肺泡上皮細胞緊密連接蛋白claudin1、3、4與肺爆震傷致肺水腫的關(guān)系研究.pdf

1、目的：
　　探討大鼠肺泡上皮細胞緊密連接蛋白claudin1、3、4與肺爆震傷致肺水腫的關(guān)系。
　　方法：
　　將10只SD大鼠隨機等分成兩組：實驗組和對照組，實驗組應(yīng)用PVC（Polyvinylchlorid，聚氯乙烯）管和爆竹建立大鼠肺爆震傷模型。各組大鼠均于4小時后處死，打開胸腔，留取肺組織用于HE染色、免疫組化染色和肺泡上皮細胞基膜染色。制備肺組織膠體鑭電鏡標(biāo)本，用于觀察肺泡上皮形態(tài)及鑭顆粒的分布。制備支氣管肺

2、泡灌洗液，應(yīng)用紫外分光光度法測定蛋白含量。免疫組化染色結(jié)果通過圖像分析軟件測出claudin1、3、4含量的平均灰度代表蛋白含量。
　　培養(yǎng)L2細胞，隨機等分成實驗組和對照組(n=6)，實驗組細胞經(jīng)高壓氣體作用，干預(yù)后2小時測claudin蛋白含量和單層細胞通透性。設(shè)計、篩選高效的siRNA，將培養(yǎng)好的L2細胞隨機等分成claudin1、3、4組，每組在隨機等分成實驗組和對照組，實驗組用相應(yīng)的siRNA分別干擾claudin1、3

3、、4蛋白的表達，干預(yù)后6小時測定相應(yīng)claudin蛋白含量、單層細胞通透性，并做免疫熒光實驗。
　　結(jié)果：
　　實驗組各大鼠在爆炸發(fā)生后均表現(xiàn)出不同程度呼吸加快及口鼻周圍出現(xiàn)粉紅色滲出液。實驗組肺臟彌漫性腫大，色澤暗紅，表面可見大小不一的出血點，對照組未見明顯異常。光鏡下見實驗組肺泡腔內(nèi)彌漫性炎細胞浸潤，大量紅細胞及液體漏出，肺泡上皮細胞基膜斷裂，細胞間隔增寬，對照未見明顯異常。電鏡下見實驗組肺泡間隔內(nèi)有大量鑭顆粒聚集，對照

4、組僅有少量鑭顆粒進入肺泡間隔。實驗組claudin1、3、4含量下降，肺水含量增加，蛋白漏出明顯相比于對照組。
　　高壓氣體作用后實驗組伊文思藍清楚率增加，claudin3、4含量降低，claudin1含量與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。siRNA干擾后，claudin3、4實驗組伊文思藍清除率增加，claudin1實驗組伊文思藍清除率與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。實驗組蛋白含量較相應(yīng)對照組蛋白含量低。免疫熒光染色顯示各目標(biāo)蛋白均僅