肌動(dòng)蛋白微絲對(duì)急性肺損傷大鼠肺泡上皮緊密連接影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)分為二部分： 實(shí)驗(yàn)一 急性肺損傷大鼠肺泡上皮緊密連接變化的實(shí)驗(yàn)研究 目的:探討急性肺損傷(ALI)大鼠肺泡上皮緊密連接(TJ)的變化。 方法:清潔級(jí)SD大鼠21只，尾靜脈注射內(nèi)毒素(LPS)復(fù)制ALI模型，分別在注射LPS前(0h)及注射后2、4、6、8、12、16h觀察以下指標(biāo)(n=3)。測定肺組織濕重/干重(W/D)比值以判斷肺水腫程度，125I白蛋白示蹤法測定大鼠肺通透性(PPI)，免疫組織化學(xué)染色

2、法觀察大鼠肺組織中閉鎖蛋白(occludin)，電鏡觀察肺組織中TJ和細(xì)胞間隙變化。 結(jié)果:與0hW/D[(3.83±0.04)]相比，2h、4h[(3.97±0.2)、(4.33±0.08)]W/D無顯著差異，6、8、12、16h[(4.76±0.2)、(5.13±0.5)、(5.85±0.5)、(4.57±0.5)]均明顯上升(P均＜0.05)，與12h相比，16hW/D顯著下降(P＜0.05)。與0hPPI[(3.13±0

3、.2)％]相比，2h和4hPPI[(2.99±0.5)％和(3.32±0.2)％]無明顯變化，6、8、12、16hPPI[(4.31±0.5)％、(4.95±0.3)％、(5.16±0.3)％、(4.75±0.1)％]均顯著增加(P均＜0.05)，而16hPPI明顯低于12h(P＜0.05)。肺組織免疫組化顯示，occludin在6h組明顯出現(xiàn)破壞，并在12h組呈現(xiàn)嚴(yán)重破壞，16h破壞與12h相比減輕。電鏡結(jié)果提示0h組可見細(xì)胞間隙緊密

4、，并可見正常TJ結(jié)構(gòu)，6h組細(xì)胞間隙增寬，12h組細(xì)胞間隙增寬并出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)紊亂，16h細(xì)胞間隙增寬。 結(jié)論:LPS誘導(dǎo)的ALI肺泡上皮TJ明顯破壞，肺泡上皮通透性明顯增加。 實(shí)驗(yàn)二 肌動(dòng)蛋白微絲對(duì)急性肺損傷大鼠肺泡上皮緊密連接影響的實(shí)驗(yàn)研究 目的:探討肌動(dòng)蛋白微絲對(duì)急性肺損傷大鼠肺泡上皮緊密連接(TJ)的影響。 方法:清潔級(jí)SD大鼠36只，內(nèi)毒素(LPS)靜脈注射復(fù)制急性肺損傷(ALI)模型，動(dòng)物隨

5、機(jī)分為6組，分別為(1)對(duì)照組(N組)，(2)急性肺損傷(ALI)組，(3)微絲解聚劑(細(xì)胞松弛素，CytoD)組，(4)微絲聚合劑(鬼臼環(huán)肽，Ph)組，(5)急性肺損傷+解聚劑(AC)組，(6)急性肺損傷+聚合劑(AP)組。6h后處死動(dòng)物。肺組織濕重/干重(W/D)判斷肺水腫程度，125I-白蛋白示蹤法測定大鼠肺泡上皮通透性(PPI)，免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察大鼠肺組織微絲密度的改變，電鏡觀察大鼠肺內(nèi)TJ的改變，Western免疫印跡

6、法測定大鼠肺組織閉鎖蛋白(occludin)表達(dá)變化。 結(jié)果:(1)肺組織W/D改變：與N組(3.89±0.1)相比，CytoD組(4.59±0.6)、ALI組(4.71±0.5)、AC組(4.79±0.1)、AP組(4.36±0.3)W/D均顯著增加(P均＜0.05)，Ph組(3.96±0.4)無顯著變化(P＞0.05)；Ph組與ALI相比明顯下降(P＜0.05)；CytoD組和AC組相比無顯著差異(P＞0.05)。(2)肺通

7、透性改變：與對(duì)照組[(3.13±0.2)％]相比，CytoD、Ph、ALI、AC、AP組的PPI[(5.95±0.3)％、(3.88±0.3)％、(4.32±0.5)％、(6.23±0.3)％、(4.10±0.4)％]均顯著增加(P均＜0.05)；CytoD和AC組PPI明顯高于ALI組(P均＜0.05)；而Ph組和AP組相比無顯著差異(P＞0.05)。(3)熒光免疫顯示，N組微絲結(jié)構(gòu)清晰，ALI組微絲呈現(xiàn)散亂破壞，CytoD組微絲結(jié)構(gòu)

8、基本消失，AC組微絲破壞明顯，Ph組則可見致密穩(wěn)定微絲分布均勻，AP組微絲有較多破壞。(4)肺組織occludin含量變化：與N組[(0.73±0.09)]相比，CytoD組(0.33±0.08)、Ph組(0.55±0.10)、ALI組(0.56±0.07)、AC組(0.31±0.10)occludin含量均顯著下降(P均＜0.05)，AP組[(0.74±0.18)]則無顯著差異；與ALI組相比，AP組occludin含量顯著增加(P均