幽門螺桿菌國(guó)內(nèi)流行株動(dòng)物模型的建立.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、背景:
  目前研究幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)在胃炎、胃潰瘍及胃癌等疾病中的致病機(jī)制的主要方式是建立動(dòng)物感染Hp的模型,模擬Hp在人體內(nèi)的致病機(jī)制?,F(xiàn)在國(guó)外Hp感染動(dòng)物模型建立的技術(shù)相對(duì)成熟。人們成功的從不同動(dòng)物及人胃中分離出多種螺桿菌,比如貓胃中分離出貓螺旋桿菌(Helicobacterfelis,Hf)等。1997年Lee等人從臨床分離出幽門螺桿菌悉尼株(Helicobacterpylori S

2、ydney strain1 SS1),此菌株能長(zhǎng)期有效的定植在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃中,并成功的在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃中產(chǎn)生慢性炎癥,萎縮性胃炎,腸上皮化生及不典型增生等病理變化?,F(xiàn)在SS1菌株作為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株,被廣泛的應(yīng)用到動(dòng)物建模中。用來建立Hp感染模型的動(dòng)物種類有很多,如沙鼠、小鼠、大鼠、豚鼠、貓、無菌豬、恒河猴等,其中一些動(dòng)物因價(jià)格昂貴、飼養(yǎng)條件高等原因限制其在試驗(yàn)中的廣泛應(yīng)用,目前蒙古沙鼠和小鼠較為常用。其中,蒙古沙鼠的Hp感染模型能較好復(fù)制Hp在人

3、類的胃中的行為模式,但是蒙古沙鼠也有價(jià)格相對(duì)較高,飼養(yǎng)方法較復(fù)雜,能產(chǎn)生的抗體及引物有限,缺乏基因轉(zhuǎn)換的特異性等缺陷。最易建立并且容易飼養(yǎng)的嚙齒類動(dòng)物模型為小鼠,尤其是C57BL/6及FVB小鼠,能夠感染貓螺桿菌及
  不同種類的Hp,并表現(xiàn)為強(qiáng)烈的輔助性T細(xì)胞1(HelperT cell1,Th1)應(yīng)答反應(yīng),而BALB/c小鼠雖然負(fù)荷菌量和C57BL/6差不多,但是其感染后主要產(chǎn)生輔助性T細(xì)胞2(Helper T cell2,T

4、h2)細(xì)胞因子,對(duì)上皮的損傷較小?,F(xiàn)階段,SS1感染的C57BL/6小鼠已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)模型。
  在國(guó)內(nèi),Hp感染相關(guān)的動(dòng)物模型的建立仍處于初級(jí)階段,建模成功率較低,動(dòng)物模型多為SS1菌株感染C57BL/6小鼠或者BALB/c小鼠,還有部分蒙古沙鼠等。因?yàn)椴煌木陮?duì)于不同的宿主也會(huì)有不同的致病性,我國(guó)致病性較強(qiáng)的菌株為vacAS1、cagA、iceA1陽性的Hp菌株,若能建立一個(gè)我國(guó)流行菌株的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物模型,對(duì)于我國(guó)Hp相關(guān)消化道疾

5、病的研究能夠建立一個(gè)更好的研究平臺(tái)。
  目的:
  本課題通過文獻(xiàn)閱讀確立空泡細(xì)胞毒素AS1(vacAS1)、細(xì)胞毒素相關(guān)基因A(cagA)、表皮接觸誘導(dǎo)基因A1(iceA1)陽性的臨床分離株為目前國(guó)內(nèi)流行株。對(duì)6株臨床HP菌株進(jìn)行基因檢測(cè),選擇vacAS1、cagA、iceA1陽性的菌株作為致病菌。選用無特殊病原體(Specifc pathogen free,SPF)的C57BL/6小鼠為研究對(duì)象,來建立國(guó)內(nèi)幽門螺桿菌流

6、行株的動(dòng)物模型,研究vacAS1、cagA、iceA1陽性的幽門螺桿菌流行株感染導(dǎo)致的小鼠胃粘膜改變,為進(jìn)一步研究致病機(jī)制、藥物治療、疫苗研究提供更好的動(dòng)物模型和研究平臺(tái)。
  方法:
  先對(duì)臨床分離的六株幽門螺桿菌行基因組檢查,確認(rèn)vacAS1、cagA、iceA1陽性的致病株,并進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增。取60只SPF級(jí)C57BL/6小鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組,模型組,每組30只。對(duì)照組正常飼養(yǎng),模型組經(jīng)口灌服vacAS1、cagA、i

7、ceA1陽性的Hp臨床分離株,每周一次,連續(xù)灌服5周,距末次灌胃后5w,10w,15w,20w,25w,30w分6批處死小鼠,每批次5只。取標(biāo)本行快速尿素酶試驗(yàn),Giemsa染色法觀察幽門螺桿菌在胃黏膜上的定植情況,HE染色觀察小鼠胃黏膜的病理變化。
  結(jié)果:
  對(duì)照組小鼠的胃竇、胃體及十二指腸粘膜的尿素酶試驗(yàn),Giemsa染色結(jié)果均陰性,模型組在距末次灌胃后5w,10w,15w,20w,25w,30w幽門螺桿菌定植率分

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