幽門螺桿菌感染小鼠呼氣試驗?zāi)Ｐ徒⒓捌溆绊懸蛩胤治?pdf

1、目的：通過建立幽門螺桿菌小鼠13C-UBT、14C-UBT模型，探究構(gòu)建小鼠呼氣模型的條件和方法，分析影響幽門螺桿菌小鼠呼氣模型儀器、條件及生物因素，為研究幽門螺桿菌動物模型提供一種無創(chuàng)性實時檢測方法，客觀評價HP疫苗在小鼠模型中的免疫保護(hù)效果以及對H.pylori致病性的深入研究提供一種簡單、快速、便宜而且可靠的診斷手段。
　　方法：
　　利用6~8周齡BABL/c小鼠構(gòu)建小鼠呼氣模型的條件方法：通過對小鼠飼喂不同13C-

2、Urea、14C-Urea藥物劑量，間隔不同時間檢測，建立13C-UBT、14C-UBT實驗?zāi)Ｐ?；飼喂不同H.pylori菌量，通過相同時間檢測，探究13C-UBT在相同檢測時間中飼喂不同菌量的小鼠的呼氣關(guān)系；小鼠飼喂不同H.pylori菌量，不同時間檢測，探究13C-UBT、14C-UBT中不同菌量和時間的相互關(guān)系。
　　探究影響幽門螺桿菌小鼠呼氣試驗?zāi)Ｐ偷纳镆蛩?，確定影響呼氣試驗的小鼠體內(nèi)菌種的組織定位，分離培養(yǎng)并篩選影響呼

3、氣試驗的小鼠體內(nèi)尿素酶陽性細(xì)菌；對分離出的尿素酶陽性細(xì)菌進(jìn)行飛行質(zhì)譜鑒定及16srDNA-PCR擴(kuò)增測序，兩種方法確定菌株菌種；對分離出的尿素酶陽性細(xì)菌進(jìn)行尿素酶活性進(jìn)行定性定量的檢測。
　　結(jié)果：
　　小鼠13C-UBT、14C-UBT同一呼氣時間檢測數(shù)值與小鼠飼喂藥量成正相關(guān)；同一飼喂藥量中隨著飼喂藥物后檢測時間延長，衡量呼氣的檢測數(shù)值增大，一定時間后達(dá)到最大值，此后隨時間的延長，檢測數(shù)值減小。
　　成功建立幽門螺

4、桿菌小鼠13C-UBT、14C-UBT模型：13C-UBT模型中選用0.1mg-13C-Urea藥量，給予小鼠300ml活動空間，飼喂藥物后呼氣10 min，收集250ml氣體進(jìn)行檢測；14C-UBT呼氣中選用0.556KBq-14C-Urea藥量，給予200ml活動空間，飼喂藥物后呼氣10min，收集150ml氣體進(jìn)行檢測；飼喂小鼠不同菌量H.pylori進(jìn)行相同呼氣時間的檢測，13C-Urea、14C-Urea呼氣試驗中呼氣數(shù)值均隨

5、著 H.pylori菌量的升高而增大；飼喂小鼠不同H.pylori菌量，13C-UBT、14C-UBT各曲線走勢相同，低濃度的菌量受到小鼠體內(nèi)因素的影響大，1×109CFU的H.pylori菌量有很好的增幅曲線和趨勢。
　　成功對小鼠呼氣試驗中參與細(xì)菌進(jìn)行定位，參與影響呼氣試驗的細(xì)菌位于胃及小腸組織，篩選出155株尿素酶陽性細(xì)菌；利用飛行質(zhì)譜及16srDNA-PCR擴(kuò)增測序兩種方法確定菌株菌種，大部分為大腸桿菌，剩余以侵肺巴斯德菌

6、居多，也檢測出緩慢葡萄球菌、流感嗜血桿菌、鏈球菌等細(xì)菌；通過對分離出的細(xì)菌進(jìn)行尿素酶活性定性定量測定，分離出的細(xì)菌尿素酶活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于H.pylori。
　　結(jié)論：
　　（1）成功建立H.pylori小鼠13C-UBT、14C-UBT模型，能夠?qū)π∈筮M(jìn)行無創(chuàng)性實時檢測；
　?。?）小鼠13C-UBT、14C-UBT模型中13C-Urea、14C-Urea飼喂藥量、H.pylori菌量、呼氣檢測時間均與檢測數(shù)值相關(guān)。其中H