hex基因在小鼠乳腺不同發(fā)育階段表達(dá)和定位的研究.pdf

1、hex（Haematopoieically Expressed homeobox，hex）基因是同源異型盒基因（homeoboxgenes）超家族中的一員，在自然界里高度保守，屬于一類調(diào)節(jié)組織器官發(fā)育的基因，最初發(fā)現(xiàn)表達(dá)在造血細(xì)胞中，用于維持造血作用期間相關(guān)的細(xì)胞分化和譜系特異性；在發(fā)育過程中hex基因的缺失將造成胚胎畸形甚至死亡。該基因廣泛存在于人、小鼠、大鼠和非洲爪蟾體內(nèi)，主要在發(fā)育中的甲狀腺、肝臟、肺、造血干細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中，近年

2、來研究人員在鼠的乳腺細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了hex基因，hex基因與乳腺的發(fā)育可能存在相關(guān)性。
　　本研究以小鼠作為乳腺發(fā)育的實(shí)驗(yàn)動物模型，通過免疫印跡分析研究hex基因在乳腺細(xì)胞中的表達(dá)，通過免疫組織化學(xué)的方法研究hex基因在乳腺細(xì)胞中的表達(dá)和定位，實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析hex基因在乳腺細(xì)胞中的表達(dá)豐度。
　　1、昆明小鼠乳腺的提取與處理
　　按小鼠發(fā)育規(guī)律將其劃分為青春期、妊娠期、哺乳期和退化期四個(gè)時(shí)期，取四個(gè)發(fā)育時(shí)期小鼠頸椎

3、脫臼處死，取其第四對乳腺一部分乳腺組織進(jìn)行固定另一部分-80℃貯存待用。分析表明，青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺組織結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)有規(guī)律的變化，即從青春期到妊娠期乳腺細(xì)胞數(shù)量逐漸增多，在泌乳期數(shù)量最多，退化期又逐漸回復(fù)到青春期的水平。
　　2、Hex蛋白在乳腺組織的定性分析
　　經(jīng)Western Blot檢測，在約30kDa處得到了特異性雜交帶，表明Hex蛋白在小鼠乳腺發(fā)育的四個(gè)時(shí)期都有表達(dá)。
　　3、Hex蛋白在乳腺組

4、織的表達(dá)和定位
　　采用免疫組織化學(xué)方法，觀察小鼠在青春期、妊娠期、哺乳期和退化期乳腺細(xì)胞中 Hex蛋白的表達(dá)和定位。結(jié)果顯示，Hex蛋白主要定位于乳腺細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，在細(xì)胞核中也偶有表達(dá)，其數(shù)量從青春期到妊娠期逐漸增長，在泌乳期達(dá)到峰值，退化期開始逐漸減少并回到青春期狀態(tài)，呈一個(gè)連續(xù)的周期性變化過程。這一過程是一個(gè)連續(xù)的周期性循環(huán)過程，其實(shí)質(zhì)是乳腺組織結(jié)構(gòu)和生物功能的不斷重建。
　　4、hex基因在乳腺組織表達(dá)豐度的檢測<