接種、移栽情況調(diào)查

1、接種、移栽情況調(diào)查接種、移栽情況調(diào)查（一）褐化（一）褐化（酚污染）（酚污染）有些材料離體后很容易褐變，甚至接種后由于外植體不斷分泌一些物質(zhì)，使培養(yǎng)基變成褐色或淡赤紅色，嚴重影響外植體的起動、分化和生長。這是初代培養(yǎng)過程中經(jīng)常遇到的一個問題。1引起褐變的原因引起褐變的原因褐變產(chǎn)生的原因主要是由于外植體由自養(yǎng)變?yōu)楫愷B(yǎng)，細胞代謝發(fā)生變化，產(chǎn)生一些植物堿，如單寧等酚類物質(zhì)而引起的。這些酚類物質(zhì)受多酚氧化酶激活，使酚類物質(zhì)被氧化后產(chǎn)生醌類物質(zhì)，這

2、些物質(zhì)一般呈棕褐色，隨著植物體或愈傷組織褐變褐變browningbrowning定義：在離體培養(yǎng)中，由于培養(yǎng)組織中的多酚氧化酶被激活，使細胞的代謝發(fā)生變化，酚類物質(zhì)被氧化棕褐色的醌類物質(zhì)，使培養(yǎng)物及培養(yǎng)基變成褐色的現(xiàn)象。引起褐變的因子：引起褐變的因子：①植物品種。有些植物材料不會褐變，而有些植物則很容易引起褐變；植物品種。有些植物材料不會褐變，而有些植物則很容易引起褐變；②生理狀態(tài)。一般分生組織產(chǎn)生醌類物質(zhì)少，褐化程度低，而已經(jīng)分化了的

3、組生理狀態(tài)。一般分生組織產(chǎn)生醌類物質(zhì)少，褐化程度低，而已經(jīng)分化了的組織產(chǎn)生醌類物質(zhì)多，褐化較嚴重；年幼的材料含醌類物質(zhì)少，而成年的材料含醌類織產(chǎn)生醌類物質(zhì)多，褐化較嚴重；年幼的材料含醌類物質(zhì)少，而成年的材料含醌類物質(zhì)多。物質(zhì)多。③取材季節(jié)。一般冬春季取材褐變輕，夏秋季取外植體接種時褐變嚴重。取材季節(jié)。一般冬春季取材褐變輕，夏秋季取外植體接種時褐變嚴重。④培養(yǎng)基成分。培養(yǎng)基中無機鹽成分高，附加植物激素濃度高。培養(yǎng)基成分。培養(yǎng)基中無機鹽成分

4、高，附加植物激素濃度高。⑤培養(yǎng)條件不當。以及培養(yǎng)溫度高時，都可以使褐變程度加重。培養(yǎng)條件不當。以及培養(yǎng)溫度高時，都可以使褐變程度加重。2防止褐變的方法防止褐變的方法（1）選擇合適的外植體。）選擇合適的外植體。根據(jù)影響褐變的因素來選擇不容易引起褐變、并具有較強的分生能力的外植體。選用幼年的材料，且對取材的時期、季節(jié)，甚至于時間要進行試驗，根據(jù)試驗及前人的經(jīng)驗選擇最合適的時期和部位進行接種。（2）加入抗氧化劑。）加入抗氧化劑。使用抗氧化劑、

5、半胱氨酸及其鹽酸鹽、二硫蘇糖醇、谷胱甘肽、抗壞血酸等。使用抗氧化劑、半胱氨酸及其鹽酸鹽、二硫蘇糖醇、谷胱甘肽、抗壞血酸等。1玻璃化苗的癥狀及嚴重性玻璃化苗的癥狀及嚴重性玻璃化玻璃化vitrificationvitrification定義：定義：植物組培過程中特有的一種生理失調(diào)和生理病變，表現(xiàn)為組培苗生長異常，幼葉和嫩梢呈半透明、水浸狀；整株矮小腫脹、失綠；葉片皺縮卷曲，脆弱易斷，這種現(xiàn)象通常稱為玻璃化。從進一步分析看出，玻璃化苗體內(nèi)含水

6、量高，而葉綠素、蛋白質(zhì)、纖維素和木質(zhì)素等干物質(zhì)含量低。光合作用能力和酶的活性降低，組織器官畸形，功能也不全，分化能力逐漸降低至完全喪失，嚴重時不能分化根。一旦形成玻璃化苗就很難恢復成正常苗，嚴重影響繁殖率，給生產(chǎn)造成很大損失。所以玻璃化苗問題是植物組織培養(yǎng)快速繁殖中亟待解決的問題之一。2產(chǎn)生玻璃化苗的因素產(chǎn)生玻璃化苗的因素（1）瓊脂和蔗糖濃度的影響。）瓊脂和蔗糖濃度的影響。瓊脂濃度低，硬度差，玻璃苗發(fā)生較嚴重；相反，如果瓊脂濃度和純度增

7、加，瓊脂濃度低，硬度差，玻璃苗發(fā)生較嚴重；相反，如果瓊脂濃度和純度增加，培養(yǎng)基硬度增加，玻璃化現(xiàn)象減少或不產(chǎn)生。培養(yǎng)基硬度增加，玻璃化現(xiàn)象減少或不產(chǎn)生。蔗糖濃度增加也可以減少玻璃苗的產(chǎn)生，在一定范圍內(nèi)，蔗糖濃度越高，玻璃蔗糖濃度增加也可以減少玻璃苗的產(chǎn)生，在一定范圍內(nèi)，蔗糖濃度越高，玻璃化苗產(chǎn)生的幾率越低。化苗產(chǎn)生的幾率越低。瓊脂和蔗糖會影響細胞的滲透壓和水勢。瓊脂和蔗糖會影響細胞的滲透壓和水勢。另外，用水培也比較容易形成玻璃化苗。（2

8、）6BA6BA濃度對玻璃苗化的影響。濃度對玻璃苗化的影響。目前快速繁殖中多數(shù)都用6BA。6BA除低廉（國產(chǎn)）外，它對很多植物芽的分化、苗的增殖是不可少的調(diào)節(jié)物質(zhì)，所以一般在初代和繼代培養(yǎng)過程中都離不開它，并且為了加速芽的分化往往用的濃度比較高。所以，試管苗繼代時間越長，體內(nèi)積累的6BA濃度就越高。很多試驗證明，培養(yǎng)基中6BA濃度和玻璃化苗產(chǎn)生頻率呈正相關(guān)，6BA的濃度越高，玻璃化苗的比率越大。（3）培養(yǎng)瓶內(nèi)空氣濕度和通氣條件的影響。）培