細粒棘球蚴Eg95基因的克隆、原核表達及抗體制備.pdf

1、囊型包蟲病是由細粒棘球絳蟲的續(xù)絳期幼蟲寄生在宿主的肝、肺等臟器引起的一種嚴重危害健康的人畜共患寄生蟲病，該病嚴重影響了我國乃至全世界人類的健康以及畜牧業(yè)的發(fā)展。囊型包蟲病的防治主要是依靠分子疫苗，Eg95基因被公認的目前細粒棘球絳蟲所有抗原基因中最有前途的疫苗候選基因。Eg95疫苗通過在六鉤蚴表面表達的抗原與抗體和補體一起介導包囊發(fā)生溶解而產生保護作用，對囊型包蟲病的防治意義重大。由于來自不同地域、不同宿主的Eg存在著差異，出于Eg95

2、疫苗的安全性和有效性的考慮，更為安全和有效的Eg95新疫苗的研發(fā)具有十分重要的意義。 本文利用PCR的方法，擴增得到細粒棘球絳蟲青海株Eg95的全長基因，測序表明該基因序列全長為1262bp，由3個外顯子，2個內含子組成，3個外顯子長度分別為70bp、306bp和95bp。Eg95基因開放閱讀框全長為471bp，編碼156個氨基酸。我們測定的Eg95基因序列與以前報道的青海株、澳大利亞株和美國株的Eg95基因序列比較表明，總共只

3、有41個堿基存在差異，其中36處發(fā)生在內含子部分，只有5處是發(fā)生在外顯子部分。在氨基酸水平上，它們之間只有2個氨基酸的差異。 利用原核表達載體pGEX-5X-1，構建了含Eg95基因的重組表達質粒pGEX-5X-1/eg95。酶切鑒定后，轉化大腸桿菌表達菌株BL21中，37℃、0.8mMIPTG條件下誘導表達。SDS-PAGE電泳顯示在40KD處有一特異性的條帶，質譜鑒定和酶聯(lián)免疫吸附鑒定(ELISA)表明在大腸桿菌中成功的表達