探討miRNA在家雞性別分化中的作用.pdf

1、近年來(lái)許多起調(diào)控作用的小分子RNA被發(fā)現(xiàn)，真核生物的基因表達(dá)中，miRNA起著非常關(guān)鍵的調(diào)控作用．在胚胎發(fā)生過(guò)程中，許多參與組織特異性的miRNA功能已被證明，但關(guān)于miRNA在胚胎性別分化階段作用的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。雞胚作為研究脊椎動(dòng)物胚胎發(fā)育生物學(xué)經(jīng)典的模型，運(yùn)用已有幾十年的歷史。但相比其它的脊椎動(dòng)物，對(duì)于家雞中的miRNA數(shù)量、種類和表達(dá)譜我們?nèi)灾跎伲绕涫桥咛テ诘男詣e分化階段。 本研究通過(guò)對(duì)性別分化前后時(shí)期家雞胚胎樣品

2、(4天齡雌、雄和7天齡雌、雄)的小RNA純化，反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增建立cDNA文庫(kù)，利用Solexa/ Illumina高通量測(cè)序方法對(duì)其測(cè)序，根據(jù)目前已公布的miRNA注釋信息對(duì)所得小RNA序列注釋分類，并從已知miRNA及其前體的序列的保守性和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，以生物信息學(xué)方法從中篩選、甄別可信度高的miRNA。隨后我們統(tǒng)計(jì)miRNA的表達(dá)量，構(gòu)建表達(dá)譜并進(jìn)行顯著差異表達(dá)分析。最終得到miR-148a，h005-5p，h014-5p，miR—2