不飽和脂肪酸及莫能菌素對(duì)羊瘤胃、血液脂肪酸合成的影響.pdf

1、本研究旨在通過體外和體內(nèi)試驗(yàn)評(píng)價(jià)植物油和瘤胃調(diào)控劑（莫能菌素）的復(fù)合使用對(duì)提高CLA及其前體物的累積效果。體外部分是利用氣相色譜法測(cè)試植物油中脂肪酸的含量，通過體外氫化試驗(yàn)篩選出合成脂肪酸效果最好的植物油及適宜的莫能菌素添加范圍；體內(nèi)部分根據(jù)體外試驗(yàn)結(jié)果將豆油和莫能菌素應(yīng)用到動(dòng)物試驗(yàn)中，研究其對(duì)瘤胃發(fā)酵、脂肪酸合成、日糧消化和血液參數(shù)的影響。體內(nèi)試驗(yàn)以豆油和莫能菌素為兩個(gè)試驗(yàn)因子，選擇4只體況良好、健康無疾病體重38±1kg安裝有永久性

2、瘤胃瘺管的綿羊?yàn)樵囼?yàn)動(dòng)物，采用4×4拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)，共分4期，每期12d，分別向動(dòng)物基礎(chǔ)日糧中添加0％（對(duì)照組，CK），4％豆油（豆油組，S組），4％豆油加25mg/kg的莫能菌素（復(fù)合組，S+M組），25mg/kg莫能菌素（莫能菌素組，M組）。
　　 試驗(yàn)一、采用毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)試常見植物油中脂肪酸的組成。測(cè)試儀器為島津GC-2010氣相色譜儀，SP-2560（100m×0.25mm×0.2μm）色譜柱，載氣高純氮?dú)猓?9.

3、999％），F(xiàn)ID檢測(cè)器240℃，進(jìn)樣口溫度240℃，分流比50:1。柱溫箱二階段程序升溫：初始溫度165℃，維持30min，以1.5℃/min速率升至200℃保持20min，再以5℃/min升到到230℃，維持5min。壓力：266.9kPa，柱流量1.04mL/min，線速度20cm/s。結(jié)果表明，毛細(xì)管氣相色譜法能很好的分離植物油中各種脂肪酸，豆油、葵花油和玉米油中油酸和亞油酸百分含量比分別為28：55、27:61和22:54，但

4、玉米油中含有4％的亞麻酸；花生油中油酸和亞油酸百分含量比為46:33，橄欖油屬于高油酸植物油，其油酸含量為78％，亞油酸為5.7％；亞麻油屬高亞麻酸類植物油，其中油酸：亞油酸：亞麻酸百分含量比為21:14:54。
　　 試驗(yàn)二、體外培養(yǎng)條件下植物油添加量的篩選。培養(yǎng)底物為0.5g微晶纖維素，培養(yǎng)液體積為60mL，培養(yǎng)瓶中植物油的添加水平分別為0、5、10、15和20mg，每個(gè)水平培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)分別為4、8、16、24、36和48h，

5、每個(gè)時(shí)間點(diǎn)設(shè)4個(gè)重復(fù)。結(jié)果表明：隨著植物油添加水平的逐漸增加，培養(yǎng)液中pH值呈上升趨勢(shì)，NH3-N濃度、TVFA濃度和48h纖維素消失率逐漸降低。在本試驗(yàn)培養(yǎng)條件下，保證瘤胃正常發(fā)酵的植物油最適宜添加量為5mg，即脂肪添加量占底物的1％。
　　 試驗(yàn)二、不同植物油體外發(fā)酵及PUFA（多不飽和脂肪酸）合成規(guī)律的研究。根據(jù)試驗(yàn)二篩選出的植物油添加量，選擇豆油、玉米油、葵花油和花生油做脂肪源，培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)分別為2、4、8、16和24h，

6、測(cè)試各時(shí)間點(diǎn)PUFA氫化及t11-C18:1累積。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，培養(yǎng)液中C18:0含量逐漸增加，c9，c12-C18:2含量逐漸降低，t11-C18:1含量先升高而后降低再升高，在24h達(dá)到最大值：添加植物油顯著提高了培養(yǎng)液中C18脂肪酸的含量（P<0.05）：培養(yǎng)液中t11-C18:1含量比較，豆油組最高（P<0.05），其次是葵花油（P<0.05），花生油最低；玉米油組c9，c12-C18:2含量最高（P<0.05），其次是豆

7、油組（P<0.05），花生油組最低。綜合比較四種植物油PUFA氫化及t11-C18:1累積，豆油作為脂肪源效果最好。
　　 試驗(yàn)四、不同水平的莫能菌素對(duì)亞油酸體外發(fā)酵及PUFA合成規(guī)律的研究。以游離脂肪酸（亞油酸）為脂肪源，微晶纖維素為培養(yǎng)底物，莫能菌素的添加量分別為0、10、20、30和40mg/kg底物，培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)分別為2、4、8、16和24h，測(cè)試各時(shí)間點(diǎn)瘤胃發(fā)酵及PUFA氫化規(guī)律。結(jié)果表明：添加莫能菌素能降低培養(yǎng)液pH值

8、，提高NH3-N和TVFA濃度，且莫能菌素添加量與纖維素消失率呈二次函數(shù)關(guān)系，關(guān)系式為y=-0.0261x2+1.065lx+7.6355，相關(guān)系數(shù)為R2=0.9918，通過導(dǎo)函數(shù)可以計(jì)算出當(dāng)莫能菌素添加量超過40.Smg/kg時(shí)抑制纖維素的消化。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長培養(yǎng)液中C18:0含量逐漸增加，且添加莫能菌素能顯著降低培養(yǎng)液中C18:0含量（P<0.05）；莫能菌素的添加量與t11-C18:1含量呈二次函數(shù)關(guān)系，關(guān)系式為y=0.001

9、4X2-0.0266X+0.3747，相關(guān)系數(shù)為R2=0.9894，通過導(dǎo)函數(shù)可以計(jì)算出當(dāng)莫能菌素添加量超過9.5mg/kg時(shí)，培養(yǎng)液中t11-C18:1隨著莫能菌素添加量的增加呈逐漸升高的趨勢(shì)。莫能菌素能顯著降低培養(yǎng)液中c9-C18:1含量（P<0.05），但莫能菌素添加量與c9-C18：1合成無劑量效應(yīng)。莫能菌素能抑制c9，c12-C18:2氫化，提高了培養(yǎng)液中c9，c12-C18:2含量，且高劑量莫能菌素抑制效果顯著（P<0.05

10、）。隨著莫能菌素添加量的增加t11-C18:1和c9，c12-C18:2氫化率逐漸降低。本試驗(yàn)根據(jù)瘤胃發(fā)酵和PUFA合成確定莫能菌素添加范圍為19～40.8mg/kg。
　　 試驗(yàn)五、豆油和莫能菌素對(duì)瘤胃脂肪酸合成規(guī)律的影響。添加豆油顯著提高了瘤胃液中C16:0和C18:0含量（P<0.05），而添加莫能菌素顯著降低了瘤胃液中C16:0和C18:0含量（P<0.05），與豆油組相比較，豆油和莫能菌素復(fù)合處理組降低了C16:0和C

11、18:0含量（P<0.05）。日糧中添加豆油瘤胃液中t11-C18:1和c9-C18:1顯著增加（P<0.05），添加莫能菌素組t11-C18:1含量顯著增加（P<0.05），而c9-C18:1含量降低，與豆油組相比較，豆油和莫能菌素復(fù)合處理組t11-C18:1顯著增加（P<0.05），說明莫能菌素對(duì)由豆油合成t11-C18:1具有促進(jìn)作用。添加豆油和莫能菌素各組均顯著提高了瘤胃液中c9，c12-C18:2和c9，t11-CLA（P<0

12、.05），且隨著飼喂時(shí)間的延長先升高后降低，c9，c12-C18:2和c9，t11-C18:2含量在飼喂后的4h達(dá)到最大值。添加莫能菌素的兩組瘤胃液中t11-C18:1、c9，c12-C18:2和c9，t11-CLA氫化率降低，而添加豆油組提高了c9，c12-C18:2氫化率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加豆油能提高瘤胃脂肪酸的含量，添加莫能菌素能降低瘤胃飽和脂肪酸的含量，提高PUFA尤其是t11-C18:1的含量，且豆油和莫能菌素復(fù)合使用效果更

13、佳。
　　 試驗(yàn)六、添加豆油和莫能菌素提高了瘤胃液pH值和BCP濃度（P>0.05），降低了NH3-N濃度（P>0.05）；豆油組顯著降低瘤胃液中TVFA濃度（P<0.05），添加莫能菌素組有提高TVFA濃度的趨勢(shì)（P>0.05），添加莫能菌素組顯著降低瘤胃液中乙酸濃度（P<0.05），單獨(dú)添加莫能菌素組顯著提高瘤胃液中丙酸濃度（P<0.05）。添加豆油和莫能菌素都降低瘤胃中纖維素酶和脂肪酶活性。綜合瘤胃發(fā)酵指標(biāo)，豆油和莫能菌素

14、復(fù)合處理不會(huì)降低瘤胃pH、NH3-N、BCP和VFA，但對(duì)微生物酶活性有降低趨勢(shì)。
　　 試驗(yàn)七、日糧中添加豆油血液中的TG、CHOL、HDL和LDL相應(yīng)的增加，添加莫能菌素顯著提高血液中Leptin的水平（P<0.05）；豆油和莫能菌素有提高血液中GLU和NEFA的趨勢(shì)，但差異不顯著（P>0.05），添加豆油顯著提高血液中T-AOC和SOD含量（P<0.05），降低了MDA含量；豆油和莫能菌素復(fù)合處理能提高機(jī)體抗氧化水平。日糧

15、中添加豆油和莫能菌素顯著降低血液中16和18碳飽和脂肪酸含量（P<0.05），提高t11-C18:1含量（P<0.05）；且豆油和莫能菌素復(fù)合處理組顯著提高血液中t11-C18:1和c9，c12-C18:2含量（P<0.05）。
　　 試驗(yàn)八、添加豆油和莫能菌素對(duì)瘤胃液相流通規(guī)律和DM降解率沒有影響（P>0.05），添加豆油顯著降低瘤胃CP降解率（P<0.05），莫能菌素能顯著降低日糧ADF降解率（P<0.05），添加豆油和莫能