雞miR-1704靶基因的初步鑒定及生物學(xué)功能研究.pdf

1、MicroRNAs是內(nèi)源性的非編碼小RNA分子，通過結(jié)合到靶基因mRNA的3'UTR，從而在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)調(diào)控基因的表達(dá)，參與機(jī)體內(nèi)許多重要的生物過程。前人在雞胚中發(fā)現(xiàn)miR-1704，但有關(guān)其功能的研究尚未見報道。本研究利用熒光定量PCR技術(shù)檢測了miR-1704在固始雞1日齡、6周齡和16周齡的9種不同組織中的表達(dá)情況;利用TargetScan在線軟件預(yù)測了m iR-1704的靶基因，對預(yù)測的靶基因在基因功能注釋數(shù)據(jù)庫DAVID和GO

2、Term Finder進(jìn)行了 GO富集和KEGG通路分析，并通過雙熒光報告系統(tǒng)初步鑒定了 miR-1704的靶基因;以實(shí)驗(yàn)室固始雞-安卡雞F2代資源群體為試驗(yàn)素材，分析了miR-1704單核苷酸多態(tài)性與資源群體經(jīng)濟(jì)性狀間的關(guān)聯(lián)性，并通過構(gòu)建miR-1704多態(tài)位點(diǎn)不同等位基因的真核表達(dá)載體對其功能進(jìn)行了探索。主要結(jié)果如下:
　　1.雞miR-1704在所檢測的組織中呈廣泛性表達(dá)，且在不同時期及不同組織間差異性表達(dá)。MiR-1704

3、在1日齡和6周齡時低豐度表達(dá)，在16周齡時高豐度表達(dá)。1日齡時，miR-1704在腿肌、下丘腦和肝臟中的表達(dá)量較高，在腎臟和大腦中的表達(dá)量較低;6周齡時，miR-1704在各組織中的表達(dá)量均較低;16周齡時，miR-1704在脾臟、腿肌和下丘腦中的表達(dá)量較高，在小腸中的表達(dá)量最低。
　　2.TargetScan預(yù)測得到miR-1704的靶基因173個。GO富集和KEGG通路分析結(jié)果表明，miR-1704靶基因顯著富集于基因表達(dá)調(diào)控

4、、生物合成、物質(zhì)代謝、生物過程調(diào)節(jié)等生物學(xué)過程，以及細(xì)胞周期、鈣信號通路和Hedgehog信號通路。利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-1704與預(yù)測靶基因BMP2和IRS2的靶標(biāo)關(guān)系，初步證實(shí)BMP2和IRS2是miR-1704的靶基因。
　　3.對miR-1704多態(tài)位點(diǎn)rs14668705 C＞G的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明，該突變與雞出生重、6周體重、8周體重、10周體重、12周體重、4周脛圍、8周脛圍、12周脛圍、屠體重、半凈膛重、

5、腿肌失水率、胸肌pH和谷草轉(zhuǎn)氨酶顯著相關(guān)(P＜0.05)，且除胸肌pH值外，各性狀CC型和GC型個體表型均值大于GG型。C＞G位點(diǎn)不同等位基因的表達(dá)研究表明，該突變顯著影響成熟miR-1704的表達(dá)(P＜0.05)。
　　由以上試驗(yàn)結(jié)果，可得出如下結(jié)論:
　　1.miR-1704在雞不同時期不同組織中廣泛性、差異性表達(dá)。
　　2.初步證實(shí)BMP2、IRS2是miR-1704的靶基因。
　　3.miR-1704前體