香豬睪丸microRNA鑒定及生物學功能分析.pdf

1、microRNA（miRNA）是一類重要的非編碼小RNA，在靶基因轉錄后水平調控基因的表達，具有明顯的階段性和組織特異性，在動物各個發(fā)育階段的生長發(fā)育和繁殖過程中起作用。香豬作為貴州地方豬品種的優(yōu)秀代表，性成熟早，產仔數(shù)少，目前香豬的繁殖調控機理不完全清楚。本文采用組織學切片技術研究不同月齡香豬睪丸的顯微結構，構建四個月齡香豬睪丸組織小RNA cDNA文庫，通過HiSeq高通量測序技術，結合生物信息學分析，鑒定出香豬不同發(fā)育期miRNA

2、的表達譜，分析差異表達的miRNA分子類型和結構，推測miRNA作用的靶基因和功能，選擇6個差異表達的miRNA，研究在不同發(fā)育時期睪丸以及其它組織的表達量變化，獲得的主要結果如下：
　　1、香豬睪丸的發(fā)育特點是4月齡時可檢測到成熟精子。
　　2、利用HiSeq高通量測序技術，獲得香豬2月齡、3月齡、7月齡和18月齡microRNA表達譜，每個表達譜的高質量microRNA序列接近600萬條。
　　3、從2月齡香豬睪丸

3、RNA文庫中鑒定出254個已知miRNA和180個候選miRNA；3月齡文庫鑒定出251個已知miRNA和176個候選miRNA；7月齡文庫鑒定了227個已知miRNA和120個候選miRNA；18月齡文庫鑒定215個已知miRNA和100個候選miRNA。隨機選擇6個miRNA分子采用實時熒光定量PCR方法證實在相應月齡的睪丸組織中都有表達。
　　4、找到1165種miRNA在四個時期睪丸文庫中的表達量有顯著差異，其中2月齡文庫

4、中有74個miRNA的表達量顯著低于3月齡文庫；2月齡文庫miRNA的表達量顯著高于7月齡文庫和18月齡文庫，分別有219個和224個miRNAs的表達量上調。3月齡文庫miRNA的表達量顯著高于7月齡文庫和18月齡文庫，分別有268個和272個miRNAs的表達量上調。7月齡文庫miRNA的表達量顯著高于18月齡文庫，有21個miRNAs的表達量上調。2月齡香豬睪丸中的miRNA表達量最高，18月齡中的表達量最低。
　　5、使用

5、mirecord軟件對10種差異表達的miRNA的靶基因進行預測，共得到1953個靶基因，經KEGG Pathway分析，這些靶基因可能參與香豬睪丸的發(fā)育和精子的發(fā)生過程。
　　6、經實時定量RT-PCR檢測，6個miRNAs在不同發(fā)育時期的睪丸組織中均表達，總體趨勢是，隨著香豬睪丸從1月齡增加到7月齡，Let-7a-5p和miR-10的表達量先升高后下降；miR-202表達量的逐漸降低；miR-200b表達量先下降后上升；miR