mir-260靶基因鑒定實(shí)驗(yàn)研究及動(dòng)力學(xué)模型.pdf

1、microRNA(miRNA)是廣泛存在于細(xì)胞中的一類(lèi)最小的功能非編碼RNA(non-coding RNA，ncRNA)。其生物學(xué)功能，主要表現(xiàn)為對(duì)靶基因(主要是信使RNA，mRNA)的調(diào)控。確定miRNA靶基因的方法有分子生物實(shí)驗(yàn)和信息學(xué)分析兩種。實(shí)驗(yàn)方法是研究miRNA調(diào)控后mRNA的水平及其蛋白變化;生物信息學(xué)方法則是依據(jù)已被實(shí)驗(yàn)證實(shí)的miRNA與其靶基因序列之間的相互作用規(guī)律設(shè)計(jì)成的軟件進(jìn)行大數(shù)據(jù)分析，在基因庫(kù)中尋找miRNA的

2、可能調(diào)控的目的基因。
　　實(shí)驗(yàn)研究表明:mir-260突變體能夠加快秀麗隱桿線蟲(chóng)的衰老進(jìn)程?？赡艿姆肿訖C(jī)制是mir-260通過(guò)間接影響基因jnk-1、eat-2的表達(dá)量來(lái)調(diào)控線蟲(chóng)的衰老進(jìn)程。本文以mir-260為研究對(duì)象，以生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和分子實(shí)驗(yàn)檢測(cè)相結(jié)合的方法，研究mir-260對(duì)與衰老相關(guān)基因的直接調(diào)控。并結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，改進(jìn)了基因調(diào)控的動(dòng)力學(xué)模型。主要工作如下:
　　在實(shí)驗(yàn)上，利用生物信息學(xué)方法(mircoRNA、mi

3、rSOM)預(yù)測(cè)mir-260的靶基因，并篩選出其中5個(gè)已報(bào)道與壽命有關(guān)的基因:coq-2、nuo-4、rps-10、tps-1、atp-3。進(jìn)行分子實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建含有mir-260和上述靶基因的質(zhì)粒，并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞，再利用雙熒光素酶報(bào)告基因方法檢測(cè)5個(gè)靶基因的熒光蛋白在不同時(shí)間的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:1，coq-2、nuo-4、rps-10、tps-1、atp-3是mir-260靶基因;2，mir-260對(duì)靶基因的調(diào)控在轉(zhuǎn)染