封閉MHC-I基因對鼠LAK細胞殺傷活性的影響.pdf

1、山東大學碩士學位論文封閉MHC-I基因對鼠LAK細胞殺傷活性的影響姓名：單寧寧申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：鄒雄20040515山東火學碩士學位論文封閉M H C ～l 基因對鼠L A K 細胞殺傷活性的影響山東大學齊魯醫(yī)院檢驗科碩士研究生單寧寧導師鄒雄教授中文摘要目的：觀察使用反義寡核苷酸( a n t i s e n s eo l i g o n u c l e o t i d e s ，A S O N ) 及小干

2、擾短鏈R N A ( s m a l li n t e r f e r n c eR N A ，s i R N A ) 封閉B A L B ／c 小鼠淋巴細胞M H C —I基因( H 一2 K 6 ) 對H2 K 。表達的影響及H 一2 K d 表達降低的淋巴因子激活的殺傷細胞( t y m p h o k i n e a c t i v a t e dk i l l e rc e l l ，L A K ) 殺傷活性的改變，探討淋巴細

3、胞M H C —I 在腫瘤免疫中的作用。方法：無菌制備B A I ，B ／c 小鼠脾淋巴細胞，由白介素一2 誘導為L A K 細胞。在J×1 0 9 幾的L A K 細胞中分別加入5 ，1 0 ，1 5 ，2 0 ，2 5 pm o l ／L 的H 一2 K t A S O N 和2 0um o l ／1 的錯義寡核苷酸，在4 X 1 0 。幾的L A K 細胞的2 4 孔培養(yǎng)板中分別加入I I 2 K 8 s i R N k

4、 ，單純轉染劑和無義s i R N A 。免疫熒光流式細胞術定量檢測A S O N和s i R N A 對L A K 細胞H 一2 K d 表達抑制作用，M T T 法和L D H 釋放試驗檢測H 一2 K d 表達降低的L A K 細胞腫瘤殺傷括性。結果：流式細胞術測定結果顯示：A S O N ( 1 5 u m o l ／1 ) 組H - 2 K d 蛋白的表達率由9 0 ．1 ±4 ．4 ％下降至7 9 ．8 ±

5、;2 ．5 ％( P < O ．叭) ，M T T 法檢測( E ／T = 7 5 ／1 ) H - 2 K 。降低的L A K 細胞對K 5 6 2 的殺傷活性由8 2 ．3 ±3 ，1 ％降到6 0 ．2 ±6 ．7 ％( 尺O ．0 1 ) ，對H 2 2 細胞株的殺傷活性由6 7 ．4 ±2 ．8 ％降到5 3 ．2 ±8 ．1 ％( P < O ．0 1 ) 。L D H 釋

6、放試驗顯示( E ／T = 4 0 ／1 ) ：對H 2 2 腫瘤細胞的殺傷活性由8 1 ．6 ±5 ．9 ％降低到7 0 ．8 ±2 ．2 ％( P < 0 ．0 1 ) 。s i R N A 組( s i R N k ／T r a n s M e s s e n g e r ：1 ．6 拋／8 蛆) H 一2 K d 蛋白的表達率由9 0 ．1±4 ．4 ％下降至4 0 ．5 ±5 ．4

7、 ％( 尺O ．0 1 ) ，M T T 法檢測( E ／T = 7 5 ／1 ) 對K 5 6 2 的殺傷活性由8 2 ．3 + B ．1 ％降到3 8 ．9 ±6 ．5 ％( 只O ．0 1 ) ，對H 2 2 細胞株的殺傷活性由6 7 ．4 ±2 ．8 ％降到4 6 ．9 - - + 4 ．6 ％( P ( O ．0 1 ) 。L D H 釋放試驗顯示( E ／T 2 4 0 ／1 ) ：對H 2 2 腫瘤細胞