RetroNectin對(duì)CIK細(xì)胞增殖、表型變化和殺傷活性影響的初步研究.pdf

1、目的：初步研究RetroNectin對(duì)CIK細(xì)胞增值、表性變化及殺傷活性的影響，并探討其可能機(jī)制。 方法：采集人外周血單個(gè)核細(xì)胞，標(biāo)本分為兩組，對(duì)照組加入IFN-γ、IL-2、IL-1α、CD3mAb等細(xì)胞因子誘導(dǎo)其增殖，實(shí)驗(yàn)組另外加入RetroNectin誘導(dǎo)，倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞形態(tài)變化，采用活細(xì)胞計(jì)數(shù)法觀察CIK細(xì)胞增殖，分別繪制細(xì)胞增值曲線；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CIK細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的表型變化；LDH法檢測(cè)CIK細(xì)胞對(duì)

2、腫瘤細(xì)胞K562細(xì)胞和PC-3細(xì)胞的殺傷活性；采用AnnexinV/PI染色，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)不同培養(yǎng)條件下第4d、7d、11d及14d的CIK細(xì)胞周期。 結(jié)果：PBMC在體外經(jīng)過(guò)多種細(xì)胞因子的誘導(dǎo)后，能大量擴(kuò)增生成CIK細(xì)胞，培養(yǎng)14天，擴(kuò)增倍數(shù)可達(dá)96.13±5.03倍；CIK細(xì)胞中的CD3<'+>CD8<'+>、CD3<'+>CD56<'+>細(xì)胞比例隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)較PBMC明顯增多；細(xì)胞的百分

3、率則逐漸下降； CIK細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞和PC-3細(xì)胞均有較強(qiáng)的殺傷活性，兩者相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，這種殺傷活性增強(qiáng)，在誘導(dǎo)培養(yǎng)的第14d殺傷活性最強(qiáng)。經(jīng)RetroNectin刺激14天后的RN-CIK細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)可達(dá)330.46±7.96倍，培養(yǎng)的第7天起明顯高于普通培養(yǎng)方法；自培養(yǎng)的第7天，RN-CIK細(xì)胞中的CD25±細(xì)胞比例較普通培養(yǎng)的CIK細(xì)胞明顯增多。但兩種培養(yǎng)方法對(duì)CIK細(xì)胞的CD3<'+>CD

4、8<'+>、CD3<'+>CD56<'+>、CD3<'+>CD4<'+>表型及細(xì)胞殺傷活性的影響無(wú)明顯差異。在培養(yǎng)的第11d，RN-CIK細(xì)胞與普通培養(yǎng)的CIK細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯差異。S期細(xì)胞的比例隨所培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高，在培養(yǎng)的第7d達(dá)到最高，并且RN-CIK細(xì)胞中S期的細(xì)胞比例明顯高于普通培養(yǎng)的CIK細(xì)胞組。 結(jié)論： (1)體外應(yīng)用抗人CD3單抗、人重組IL-1α、人重組IFN-γ和人重組IL-2能誘導(dǎo)PBMC生成