芹菜素對人CIK細胞殺傷結腸癌SW1116細胞的影響及其機制研究.pdf

1、目的：探討芹菜素(Apigenin，Ap)對細胞因子誘導的殺傷(CIK)細胞殺傷結腸癌SW1116細胞的影響及其機制。
　　方法：采集健康志愿者外周血20ml，用淋巴細胞分離液分離外周血單核細胞(PBMC)，在體外經(jīng)多種細胞因子誘導培養(yǎng)CIK細胞；將不同濃度的芹菜素分別作用于CIK細胞和結腸癌SW1116細胞24h、48h及72h后，用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測芹菜素對CIK細胞及結腸癌SW1116細胞生長的影響；流式細胞術(

2、FCM)檢測不同濃度的芹菜素作用48h后CIK細胞顆粒酶B、穿孔素及CD107a的表達；乳酸脫氫酶(LDH)釋放法檢測不同濃度芹菜素作用CIK細胞48h后，CIK細胞對結腸癌SW1116細胞的殺傷活性；Western-blot法檢測不同濃度芹菜素作用CIK細胞48h后SLP76在CIK細胞中的表達水平。
　　結果：MTT結果顯示，空白對照組和溶劑對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，與對照組比較，芹菜素濃度為1.17～4.7

3、μmol/L時在24h、48h及72h均能顯著促進CIK細胞的增殖(P<0.05)，超過37.5μmol/L時，CIK細胞的增殖受抑制，同一濃度下芹菜素作用三個時間段以48h段增殖作用更強。0.58～9.4μmol/L的芹菜素作用后，SW1116細胞的生長抑制率逐漸上升，但與對照組比較無顯著差異(P>0.05)，37.5～300μmol/L芹菜素在三個時間段對結腸癌SW1116細胞生長均有明顯抑制作用(P<0.05)，且相同的時間段下，

4、芹菜素濃度越高，對結腸癌SW1116細胞抑制作用越強。FCM分析顯示，2.35～9.4μmol/L芹菜素作用48h后，CIK細胞的顆粒酶B、穿孔素及CD107a的表達率顯著高于對照組(P<0.05)。LDH釋放法結果顯示濃度1.17～9.4μmol/L的芹菜素作用48h后，CIK細胞對結腸癌細胞SW1116的殺傷活性顯著高于對照組(P<0.05)，且呈先增強后下降趨勢，當濃度為2.35μmol/L時殺傷活性達最高峰(63.5％)。Wes

5、tern blot結果顯示不同濃度芹菜素誘導CIK細胞48h后，SLP76的表達存在差異，0.58～9.4μmol/L芹菜素作用CIK細胞后SLP76蛋白的表達顯著高于對照組(P<0.05)，灰度值分析結果顯示，濃度2.35μmol/L組灰度值最高，37.5μmol/L濃度組灰度值最低。
　　結論：適當濃度的芹菜素能夠有效促進CIK細胞的增殖；較高濃度的芹菜素對結腸癌SW1116細胞有明顯的抑制作用；適當濃度的芹菜素能夠增強CIK