干擾SEDL基因表達對軟骨細胞生理活性的影響.pdf

1、目的：初步研究干擾SEDL基因表達后對人軟骨細胞中II型膠原蛋白表達水平、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)位置分布及超微結(jié)構(gòu)和軟骨細胞活性的影響。
　　方法：將靶向干擾SEDL基因的病毒轉(zhuǎn)染入人軟骨細胞中，QPCR及Wes tern Blot分別檢測SEDL基因及Sedlin蛋白表達水平，評價干擾SED L基因的軟骨細胞模型是否建立成功；免疫熒光及Western Blot檢測II型膠原蛋白表達情況；熒光探針檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)位置分布改變；電鏡檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)超微結(jié)構(gòu)改變

2、；MTT方法檢測軟骨細胞增殖活性情況。
　　結(jié)果：1.轉(zhuǎn)染干擾SEDL基因病毒的軟骨細胞SEDL基因表達明顯降低，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。Sedlin蛋白表達降低，表明干擾SEDL基因的細胞模型構(gòu)建成功。2.隨著Sedlin蛋白的減少，II型膠原蛋白表達量降低,具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。3.細胞模型中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分布發(fā)生改變，其形態(tài)變圓，觸角變少，顏色變淡，細胞與細胞間內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光排列不規(guī)則，紊亂。4.電鏡下觀察，細胞模型中