卷柏降糖活性篩選和主要有效成分改善胰島素抵抗作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：采用HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗模型探討卷柏的降糖作用以及降糖的活性部位；進(jìn)一步研究主要有效成分體外降糖特點(diǎn)以及對胰島素抵抗是否有改善作用。 方法：首先采用HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗實(shí)驗(yàn)比較卷柏水提物及水提物上D101大孔吸附樹脂所得不同洗脫部位的降糖活性，篩選出降糖作用最佳部位，并結(jié)合卷柏HPLC色譜圖指認(rèn)該部位主要成分。根據(jù)活性部位所含化合物的種類、性質(zhì)改進(jìn)提取方法，結(jié)合HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗實(shí)驗(yàn)，與卷柏水提活性部位比較降

2、糖活性，采用HPLC色譜圖進(jìn)行成分比對，確認(rèn)提取方法和主要有效成分；檢測主要有效成分對HepG2細(xì)胞培養(yǎng)基中葡萄糖消耗作用；建立胰島素抵抗細(xì)胞模型，采用該細(xì)胞模型初步探討卷柏有效成分降糖的機(jī)理。 結(jié)果：(1)卷柏水提取物大孔吸附樹脂50％乙醇洗脫部位和70％乙醇回流提取物具有較高的降糖活性，結(jié)合建立的卷柏HPLC色譜圖，提示卷柏降糖作用為黃酮類化合物，穗花杉雙黃酮為主要的降糖活性成分。(2)在對穗花杉雙黃酮體外降糖活性實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)

3、，中濃度葡萄糖(15.3mmol/L)培養(yǎng)基條件下10μg/ml穗花杉雙黃酮降糖作用最強(qiáng)，與胰島素同時(shí)用藥時(shí)具有明顯的協(xié)同降糖作用。(3)建立了穩(wěn)定可靠的胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型，即將HepG2細(xì)胞置于10-6mol·L-1的胰島素中48h，HepG2細(xì)胞對胰島素的作用產(chǎn)生抵抗，該特性可維持48h。(4)穗花杉雙黃酮?jiǎng)┝繛?0μg/ml時(shí)，能夠促進(jìn)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型的葡萄糖消耗，與胰島素具有一定的協(xié)同效應(yīng)，并且在胰島素抵抗

4、細(xì)胞模型復(fù)制過程中，向培養(yǎng)基中加入劑量為10μg/ml穗花杉雙黃酮，細(xì)胞的葡萄糖消耗量明顯提高。 結(jié)論：由HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗實(shí)驗(yàn)結(jié)合卷柏HPLC圖譜色譜峰指認(rèn)的結(jié)果，提示卷柏降糖作用的物質(zhì)基礎(chǔ)為黃酮類化合物，穗花杉雙黃酮為主要有效成分。穗花杉雙黃酮可通過肝細(xì)胞發(fā)揮降糖作用，在一定條件下可明顯地促進(jìn)HepG2紐胞的基礎(chǔ)葡萄糖消耗、胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗，增加胰島素的敏感性，提示對細(xì)胞水平的胰島素抵抗病理狀態(tài)的形成