mir-30d對人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞功能和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、胚胎著床是人類生殖的一個關(guān)鍵步驟,成功建立子宮內(nèi)膜容受性,又是胚胎著床的關(guān)鍵步驟。子宮內(nèi)膜容受性(endometrial receptivity,ER)是指子宮內(nèi)膜允許胚胎黏附、侵入并誘導(dǎo)內(nèi)膜間質(zhì)發(fā)生一系列變化,最終植入內(nèi)膜的一種狀態(tài),這段時間被稱為“種植窗”期。容受期在雌孕激素的協(xié)同調(diào)控下,受細(xì)胞因子,粘附分子,生長因子和脂質(zhì)等諸多分子的調(diào)控,其中也包括miRNA。miRNA是一種非編碼 RNA,高度保守,長度約18-22核苷酸,不僅

2、可以降解其靶基因,抑制蛋白翻譯,還參與胚胎著床和ER的建立。之前的研究中,mir-30d在容受期顯著上調(diào),且表現(xiàn)出最高的豐度和變化倍數(shù),提示mir-30d在ER的調(diào)節(jié)中可能是一個重要的調(diào)節(jié)分子。然而mir-30d在子宮內(nèi)膜中的分布規(guī)律,相關(guān)功能和所調(diào)控的通路在人類和模式動物中都鮮見報道。本研究通過研究mir-30d在子宮內(nèi)膜中的分布、功能以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響,為進一步認(rèn)識 ER的調(diào)控提供一個新的角度,為評估內(nèi)膜容受狀態(tài)提供依據(jù)。

3、r>　　目的：
　　1.檢測mir-30d在子宮內(nèi)膜上皮和間質(zhì)細(xì)胞中定性和定量的表達(dá)。
　　2.明確mir-30d體外表達(dá)水平的改變對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞胚泡黏附能力的調(diào)節(jié)作用。
　　3.了解mir-30d對子宮內(nèi)膜上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。
　　方法：
　　1、采用原位雜交法,檢測mir-30d在不同周期子宮內(nèi)膜中分布的情況;利用分離原代子宮內(nèi)膜上皮和基質(zhì)細(xì)胞,以及Real-time PCR的方法定量分析mir-

4、30d在上皮和基質(zhì)細(xì)胞中的分布。
　　2.通過轉(zhuǎn)染mir-30d的抑制物(inhibitor)和模擬物(mimic),在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞Ishikawa中建立mir-30d的得功能和封閉mir-30d的Ishikawa細(xì)胞模型。
　　3.利用上皮細(xì)胞-滋養(yǎng)細(xì)胞球(Jarspheroid)的體外著床模型分析mir-30d表達(dá)水平改變對胚泡侵入和黏附的影響。
　　4.通過Western blot和real-time PCR

5、檢測mir-30d表達(dá)水平改變對上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的標(biāo)志物表達(dá)水平的影響,利用劃痕實驗驗證mir-30d表達(dá)水平改變后對內(nèi)膜上皮細(xì)胞遷移能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1、原位雜交表明mir-30d主要表達(dá)與子宮內(nèi)膜上皮,Real-time PCR表明mir-30d在上皮的表達(dá)量多于基質(zhì);
　　2、轉(zhuǎn)染72小時后,當(dāng)濃度達(dá)到50nmol/L時,mir-30d抑制物和模擬物可顯著改變Ishikwa中mir-30d的表達(dá);mir

6、-30d Mimic不但可以促進胚泡的粘附,還能夠抑制胚泡的侵入;
　　3、mir-30d抑制物和模擬物,可以顯著調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epitheliai-mesenchymal transition,EMT)的相關(guān)基因,同時也具備調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞遷移的能力。
　　結(jié)論：
　　mir-30d作為一個調(diào)控因子,改變?nèi)菔芷诘淖訉m內(nèi)膜上皮細(xì)胞的形態(tài)和功能,并參與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,在子宮內(nèi)膜容受期的建立中扮演