HIF-1α介導(dǎo)子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞EMT在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf

1、目的:探討低氧誘導(dǎo)因子（HIF-1α）是否通過介導(dǎo)子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）參與子宮內(nèi)膜異位癥的形成和發(fā)展。
　　方法：1）收集明確診斷為子宮內(nèi)膜異位癥的患者（Ⅲ～Ⅳ期）在位和異位增生期子宮內(nèi)膜以及單純因輸卵管因素行腹腔鏡手術(shù)的不孕癥患者增生期子宮內(nèi)膜（對(duì)照組），利用免疫組化方法檢測(cè)子宮內(nèi)膜HIF-1α，βcatenin，E-cadherin，N-cadherin，vimentin的表達(dá)；2）體外分離并培養(yǎng)人子宮內(nèi)

2、膜腺上皮細(xì)胞，分別在常氧及1％O2低氧環(huán)境中培養(yǎng)1、2、4、8小時(shí)，利用Real time PCR和western blot技術(shù)檢測(cè)子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞HIF-1α,β-catenin, snail, E-cadherin, N-cadherin, vimentin mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)；3）由于人原代子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞（EEC）不能傳代培養(yǎng)，用雌激素受體（ER）陽性的子宮內(nèi)膜腺上皮癌細(xì)胞系Ishikawa代替人子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞，用細(xì)

3、胞轉(zhuǎn)染的方法過表達(dá)HIF-1α和靶向沉默HIF-1α，檢測(cè)Ishikawa細(xì)胞中HIF-1α,β-catenin, snail, E-cadherin, N-cadherin, vimentin mRNA及蛋白的表達(dá)；4）用transwell技術(shù)檢測(cè)分別在低氧和常氧環(huán)境中子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞和Ishikawa細(xì)胞侵襲能力變化，并檢測(cè)靶向沉默HIF-1α后，Ishikawa細(xì)胞在低氧環(huán)境中侵襲能力的變化。
　　結(jié)果：1）正常子宮內(nèi)膜組

4、織、內(nèi)異癥患者在位子宮內(nèi)膜組織和異位子宮內(nèi)膜組織中HIF-1α的陽性表達(dá)率分別為35%、33.3%和85.7%，β-catenin的陽性表達(dá)率分被為15%、19.0%和57.1%，E-cadherin的陽性表達(dá)率分別為95%、90.5%和57.1%，N-cadherin的陽性表達(dá)率分別為5%、9.5%和38.1%，vimentin的陽性表達(dá)率分別為10%、23.8%和61.9%，五種蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織、內(nèi)異癥患者在位子宮內(nèi)膜組織、異

5、位子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2）不同時(shí)間低氧培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞后，HIF-1α、N-cadherin、β-catenin、snail表達(dá)均增高，以4小時(shí)最明顯，而E-cadherin表達(dá)降低，以2小時(shí)和4小時(shí)最顯著（P<0.05）。同時(shí)觀察到低氧處理48小時(shí)后，子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞分散生長并發(fā)生紡錘狀細(xì)胞形態(tài)的改變。3）轉(zhuǎn)染HIF-1α過表達(dá)質(zhì)粒后，Ishikawa細(xì)胞E-cadherin表達(dá)明顯下降，

6、N-cadherin，HIF-1α，β-catenin，vimentin和 snail表達(dá)增強(qiáng)；沉默HIF-1α基因后，Ishikawa細(xì)胞E-cadherin表達(dá)明顯升高，N-cadherin，HIF-1α，β-catenin，vimentin和snail表達(dá)下降，抑制低氧介導(dǎo)的EMT的發(fā)生。4）低氧組人子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞和Ishikawa細(xì)胞的侵襲性均較常氧組明顯增加，靶向沉默HIF-1α后Ishikawa細(xì)胞在低氧環(huán)境中侵襲性明顯