鼻咽癌患者血漿EB病毒DNA定量檢測(cè)及其臨床意義.pdf

1、背景與目的：鼻咽癌是我國(guó)華南地區(qū)的常見(jiàn)腫瘤，素有“廣東瘤”之稱。廣東省每年新發(fā)病例約5000例。放射治療是主要的治療手段，早期患者5年生存率達(dá)90％而晚期患者5年生存率僅為58％。大量資料顯示EB病毒和鼻咽癌密切相關(guān)。目前常用與EB病毒相關(guān)的VCA/IgA、EA/IgA進(jìn)行早期診斷、監(jiān)測(cè)療效、判斷預(yù)后等，然而這兩項(xiàng)指標(biāo)對(duì)鼻咽癌療效評(píng)價(jià)的意義不大。因此，尋找新的分子學(xué)方面的指標(biāo)來(lái)指導(dǎo)臨床治療對(duì)改善鼻咽癌的療效有較大的臨床意義。本研究旨在探

2、討EBV-DNA在鼻咽癌診斷、療效監(jiān)測(cè)方面的意義。 材料與方法： 1.2006年11月至2007年5月在我科住院的經(jīng)病理證實(shí)的初診鼻咽癌患者共113例。對(duì)其中的61例誘導(dǎo)化療加放療者在治療前，誘導(dǎo)化療后，放療36Gy，治療結(jié)束各抽血一次，檢測(cè)血漿EBV-DNA、VCA/IgA和EA/IgA。對(duì)其中的52例單純放療者在治療前，放療36Gy，治療結(jié)束各抽血一次，檢測(cè)血漿EBV-DNA、VCA/IgA和EA/IgA。并在抽血的

3、當(dāng)天對(duì)患者進(jìn)行鼻咽電子鏡檢查和體查，判斷治療效果。另外收集健康體檢者84例。抽血檢測(cè)血漿EBV-DNA、VCA/IgA和EA/IgA。 2.2006年11月至2007年11月期間，在我院就診的鼻咽癌治療后患者149例，包括遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者60例，局部復(fù)發(fā)者29例和隨訪2年以上的無(wú)瘤生存者60例。以上患者均經(jīng)臨床、影像學(xué)資料或病理證實(shí)。上述患者抽血檢測(cè)血漿EBV-DNA、VCA/IgA和EA/IgA。其中并對(duì)16例轉(zhuǎn)移患者在每2個(gè)療程化

4、療后抽血并采用影像學(xué)檢查評(píng)價(jià)療效。 3.血漿EBV-DNA檢測(cè)采用熒光定量PCR法，血漿VCA/IgA、EA/IgA抗體檢測(cè)采用免疫酶法。 4.初診113例患者中，61例誘導(dǎo)化療加放療，52例單純放療。誘導(dǎo)化療方案均為2程PF方案。放射治療采用Co60γ線或直線加速器的6～8MV高能X線常規(guī)外照射，照射區(qū)域包括鼻咽原發(fā)灶、顱底及頸部淋巴引流區(qū)，鼻咽原發(fā)灶劑量為68～74 Gy，頸轉(zhuǎn)移灶劑量60～64 Gy，預(yù)防劑量50

5、Gy。常規(guī)分割連續(xù)照射。16例轉(zhuǎn)移患者行6個(gè)療程化療，化療方案為PF、TPF、TP。 5.所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)在SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包上進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。中位數(shù)的比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)，樣本率(構(gòu)成比)的比較采用卡方檢驗(yàn)。采用雙側(cè)檢驗(yàn)，p＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 初診鼻咽癌患者中EBV-DNA的陽(yáng)性率為80％(90/113)，中位拷貝數(shù)為34200拷貝/ml，健康對(duì)照人群中陽(yáng)性率為2.4％(2/84)，中位拷貝

6、數(shù)為0拷貝/ml，兩組比較有顯著性差異(p=0.000)。對(duì)EBV-DNA與VCA/IgA的ROC曲線進(jìn)行比較，結(jié)果顯示VCA/IgA的曲線下面積大于EBV-DNA。當(dāng)兩者特異度一致時(shí)(97.6％)，VCA/IgA與EBV-DNA的敏感度為73.5％和80％。取兩者特異度相同位置處(97.6％)的診斷界點(diǎn)，EBV-DNA拷貝數(shù)≥1000copies/ml，VCA/IgA＞80。當(dāng)兩者之一達(dá)到診斷標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，即為陽(yáng)性。此時(shí)兩者聯(lián)合診斷的敏感度

7、為94％(106/113)，特異度為94％(81/84)。 放療后轉(zhuǎn)移患者、復(fù)發(fā)患者以及持續(xù)緩解者EBV-DNA的中位拷貝數(shù)分別為625000拷貝/ml，20600拷貝/ml和0拷貝/ml，三組比較有顯著性差異(p=0.000)。而三組鼻咽癌患者中VCA/IgA、EA/IgA滴度水平差異無(wú)顯著性(p＞0.05)。在特異度相同的情況下，EBV-DNA診斷轉(zhuǎn)移鼻咽癌的敏感度較復(fù)發(fā)高。經(jīng)ROC曲線分析EBV-DNA診斷轉(zhuǎn)移鼻咽癌的價(jià)值

8、最大(p=0.000)。 分析113例初診鼻明癌的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)與臨床的關(guān)系時(shí)顯示，不同的N分期以及臨床分期EBV-DNA拷貝數(shù)有顯著性差異(p=0.000；p=0.000)，隨著N分期以及臨床分期的增高，EBV-DNA拷貝數(shù)升高。而性別、年齡、病理類型、T分期間EBV-DNA拷貝數(shù)比較差異無(wú)顯著性(p＞0.05)。對(duì)29例復(fù)發(fā)患者進(jìn)行類似分析，結(jié)果顯示復(fù)發(fā)鼻咽癌不同rT、rTNM分期之間EBV-DNA拷貝數(shù)差異有顯著

9、性(p=0.049；p=0.048)，隨著rT、rTNM分期的增高，EBV-DNA拷貝數(shù)升高。對(duì)52例初治單純放療患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)隨著放療的進(jìn)行血漿EBV-DNA拷貝數(shù)逐漸降低(p=0.000)。放療前、放療36Gy、放療結(jié)束時(shí)分別為12950拷貝/ml(四分位數(shù)間距為0.54575拷貝/ml)，0拷貝/ml(四分位數(shù)間距為0-0拷貝/ml)，0拷貝/ml(四分位數(shù)間距為0-0拷貝/ml)。而VCA/IgA、EA/IgA滴度無(wú)明顯

10、變化(p＞0.05)。 對(duì)61例誘導(dǎo)化療加放療者進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，隨著化、放療的進(jìn)行血漿EBV-DNA拷貝數(shù)逐漸降低(p=0.000)。治療前，誘導(dǎo)化療后、放療36Gy、放療結(jié)束時(shí)分別為75400拷貝/ml(四分位數(shù)間距為8180-3810007拷貝/ml)，0拷貝/ml(四分位數(shù)間距為0-29600拷貝/ml)，0拷貝/ml(四分位數(shù)間距為0-0拷貝/ml)，0拷貝/ml(四分位數(shù)間距為0-0拷貝/ml)。而VCA/Iga、EA/

11、IgA滴度無(wú)明顯變化(p＞0.05)。 113例初診鼻咽癌患者中，治療結(jié)束時(shí)全消95例，殘留18例。95例全消者中，治療后血漿EBV-DNA陰性88例，陽(yáng)性7例。而在殘留的18例患者中，放療后血漿EBV-DNA陰性10例，陽(yáng)性8例，兩者比較有顯著性差異(x2=14.99,p＜0.05)。分析治療后EBV-DNA的拷貝數(shù)與近期療效的關(guān)系，結(jié)果顯示全消組和殘留組治療后EBV-DNA的拷貝數(shù)分別為0拷貝/ml和1455拷貝/ml，兩組

12、比較有顯著性差異(F=22.754，p=0.000)。 對(duì)轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者進(jìn)行療效監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)EBV-DNA水平下降者，療效評(píng)價(jià)與EBV-DNA水平變化基本一致，一致率達(dá)80％以上。對(duì)升高者，療效評(píng)價(jià)與EBV-DNA水平變化高度一致，一致率達(dá)100％。而對(duì)于EBV-DNA水平一直為0者，或在治療過(guò)程中降為0者，療效評(píng)價(jià)與EBV-DNA水平變化不一致。比較患者的療效評(píng)價(jià)與EBV-DNA(取對(duì)數(shù))化療前后的變化的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)PR、SD、

13、PD三組患者的均值分別為-4.63，-2.25，3.23，三組比較有顯著性差異(p=0.025)。 結(jié)論： 1.血漿EBV-DNA檢測(cè)可作為鼻咽癌診斷的一項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)，與VCA/IgA聯(lián)合應(yīng)用可提高鼻咽癌診斷的準(zhǔn)確性。 2.血漿EBV-DNA檢測(cè)可作為鼻咽癌治療后是否出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的一項(xiàng)診斷指標(biāo)，而VCA/IgA、EA/IgA對(duì)轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)鼻咽癌的診斷意義不大。 3.血漿EBV-DNA能反映鼻咽癌的腫瘤負(fù)荷