TGF-β1下調(diào)NK細(xì)胞雙信號(hào)分子NKG2D-DAP10和2B4-SAP介導(dǎo)HBV持續(xù)性感染.pdf

1、HBV持續(xù)性感染的機(jī)制尚有待研究。HBV感染的過(guò)程非常復(fù)雜，目前按照病史將其分為三個(gè)階段的方法越來(lái)越被各界所接受，即將其分為：免疫耐受期，免疫活化期和低活動(dòng)期。在免疫耐受期，大部分病人體內(nèi)病毒具有成熟的逃逸機(jī)制來(lái)避免被免疫細(xì)胞清除，從而發(fā)展成持續(xù)性感染狀態(tài)。過(guò)去研究認(rèn)為，NK細(xì)胞在慢性乙肝感染中扮演著重要的角色，然而NK細(xì)胞在免疫耐受中所起到作用以及免疫耐受的機(jī)制都缺乏進(jìn)一步的研究。
　　 NK細(xì)胞是抗病毒天然免疫反應(yīng)中最早發(fā)揮

2、作用的免疫細(xì)胞。NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞功能的活化需要多個(gè)活化性受體信號(hào)的激活，例如NKG2D和CD244共活化。為了研究持續(xù)性HBV感染中天然免疫反應(yīng)所發(fā)揮的作用，我們檢測(cè)了154例HBV病人和95例正常人樣品。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫耐受病人外周血NK細(xì)胞上NKG2D和CD244表達(dá)明顯下降，并且其對(duì)應(yīng)的接頭蛋白DAPIO和SAP也較正常人顯著降低。隨后對(duì)于功能的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，耐受病人NK細(xì)胞分泌干擾素和殺傷功能都顯著下降。這種表型和功能的改變應(yīng)該與病

3、人體內(nèi)的高TGF-β1表達(dá)有關(guān)，如果用TGF-β1中和性抗體作用，可以部分恢復(fù)表型和功能缺陷。這些研究發(fā)現(xiàn)為日后完善新穎的臨床治療手段提供了理論基礎(chǔ)。
　　 在本研究工作中，我們提供充分的研究證據(jù)證明，高水平的TGF-β1可以降低NK細(xì)胞上NKG2D和CD244的表達(dá)，并最終導(dǎo)致病人的HBV持續(xù)性感染狀態(tài)：
　　 （一）我們首先發(fā)現(xiàn)免疫耐受病人外周血中NK細(xì)胞的NKG2D和CD244表達(dá)相對(duì)于正常人，免疫活化病人和低活動(dòng)

4、期病人顯著下降，并且NKG2D和CD244的表達(dá)下降還伴隨著其接頭蛋白DAP10和SAP的表達(dá)降低。提示我們其NK細(xì)胞的活化性信號(hào)通路受到影響。
　　 （二）我們發(fā)現(xiàn)病人體內(nèi)交聯(lián)共刺激信號(hào)并不能發(fā)揮正常的功能，交聯(lián)二抗不能活化免疫耐受病人NK細(xì)胞中的NKG2D和CD244共刺激信號(hào)，而且沒(méi)有明顯的鈣離子流出現(xiàn)，說(shuō)明免疫耐受期病人的NK細(xì)胞不能有效活化且處于耐受狀態(tài)，并且免疫耐受病人NK細(xì)胞殺傷51Cr標(biāo)記的K562細(xì)胞以及分泌I

5、FN-γ的能力均顯著下降。這些結(jié)果表明，免疫耐受期病人NK細(xì)胞的表型改變可能伴隨著NK細(xì)胞功能的改變。
　　 （三）加入TGF-p1中和抗體，可以一定程度上恢復(fù)NKG2D和CD244表達(dá)。我們用CBA多細(xì)胞因子檢測(cè)和ELISA實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)病人和正常人血清中TGF-β1的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，免疫耐受病人體內(nèi)TGF-β1表達(dá)要顯著高于其他細(xì)胞因子，也顯著高于其他分期的病人和正常人。加入TGF-β1中和抗體后，可以部分恢復(fù)NK細(xì)胞的功能