AngⅡ和TGF-β-,1-交叉對話介導心肌重構信號通路的研究.pdf

1、第一部分
　　目的：探討炎癥因子對心肌梗死(MI)后大鼠心室重構的影響及與相互關系。
　　 方法：制作心肌梗死(MI)模型將雄性SD大鼠120 只，隨機分MI組(75 只)和假手術組(45 只)，在處死動物之前檢測血流動力學和組織形態(tài)學如左室重量指數(左室與體重比)和心梗面積大小。心梗動物行冠脈前降支結扎，假手術組動物只穿線但不結扎。于手術后3d、1w、4w、24w分別觀察不同時間點的胚胎基因(β肌球蛋白重鏈)，Ⅰ、Ⅲ型

2、膠原和炎癥因子的mRNA 水平和同期的膠原分子在心肌的分布表達變化。
　　 結果：心肌梗死后第3天胚胎基因β-MHC、膠原(Ⅰ，Ⅲ型膠原)、細胞因子(TGF-β1、TNF-α)都上升，一直持續(xù)到第4周。梗死區(qū)Ⅰ，Ⅲ型膠原在第4w 仍然比非梗死區(qū)為高，即使在第24w 非梗死區(qū)的膠原水平仍然高于假手術組。TGF-β1、TNF-α在第1w達到高峰后逐漸下降到第24w 時非梗死區(qū)比梗死區(qū)升高，與假手術組相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，

3、細胞因子TGF-β1、TNF-α通過調節(jié)收縮蛋白基因和胚胎基因及膠原從而扮演重要角色。相關性分析提示梗死區(qū)TGF-β1、TNF-α與Ⅰ，Ⅲ型膠原、β-MHC；非梗死區(qū)TGF-β1、TNF-α與Ⅰ，Ⅲ型膠原存在相關。
　　 結論：炎癥因子參與心室重塑的病理生理過程，干預細胞因子可能作為早期防治心室重塑的手段。
　　 第二部分
　　 目的：通過研究新生大鼠體外培養(yǎng)的心肌細胞和成纖維細胞的信號轉導機制交叉對話探討心室重

4、構機制。
　　 方法：用AngⅡ和TGF-β1 及其相應的阻斷劑Valsartan和Staurosporine 刺激體外培養(yǎng)新生大鼠心肌細胞和成纖維細胞觀察心室重構。蛋白含量，搏動頻率，細胞表面積評價心肌細胞肥大。流式細胞儀評價心肌細胞凋亡。MTT 評判心肌細胞和成纖維細胞增殖。RT-PCR檢測ANF，β-MHC，Bax，Ⅰ、Ⅲ型膠原,MMP2，Smad3 等mRNA 水平。Western blotting檢測磷酸化Stat1,

5、Stat1,磷酸化Stat3,Stat3,Smad2/3。明膠酶譜法檢測MMP 活性。放免法檢測培養(yǎng)細胞上清的AngⅡ。ELISA 法檢測培養(yǎng)上清的TGF-β1。
　　 結果：AngⅡ(10-7mol/L)或者TGF-β1(3ng/ml)刺激心肌細胞的蛋白含量，搏動頻率，細胞面積呈現時間依賴方式的增加。MTT和流式細胞儀檢測促凋亡和促存活揭示AngⅡ和TGF-β1 刺激心肌細胞呈現濃度和時間依賴性。MTT檢測成纖維細胞增殖也提示

6、AngⅡ和TGF-β1 刺激成纖維細胞呈現濃度和時間依賴性變化。與對照組相比AngⅡ和TGF-β1 刺激明顯增加ANF，β-MHC，Bax，Ⅰ、Ⅲ型膠原,MMP2,Smad3的mRNA 水平。AngⅡ和TGF-β1 刺激磷酸化Stat1/Stat1，磷酸化Stat3/Stat3，Smad2/3的增加可以被相應的阻斷劑呈現時間依賴式的方式逆轉。明膠酶譜法檢測AngⅡ或TGF-β1 刺激培養(yǎng)成纖維細胞的上清的MMP 活性呈現時間依賴性。預先

7、給予AT1 阻斷劑Valsartan 可以逆轉AngⅡ刺激培養(yǎng)心肌細胞和心臟成纖維細胞的分泌的TGF-β1 增加。PKC 抑制劑Staurosporine 明顯抑制TGF-β1 促進心肌細胞和心臟成纖維細胞分泌AngⅡ。
　　 結論：AngⅡ和TGF-β1 通過Stat1,Stat3,和Samd2/3 信號途徑介導心肌細胞肥大，凋亡，增殖。心肌細胞和成纖維細胞的交叉對話可以對于心室重構提供有效干預方法。
　　 第三部分<

8、br>　　 目的：通過研究纈沙坦對急性心肌梗死病人的細胞因子和RAS 影響探討干預心室重構的可能機制。
　　 方法：應用酶聯免疫吸附實驗、放射免疫法、常規(guī)生化檢測40例纈沙坦治療急性心肌梗死組和39 急性心肌梗死對照組病人入院即刻和第7天外周血的促炎癥細胞因子TNFα,促纖維化細胞因子TGF-β1，抗炎癥細胞因子IL-10，hsCRP(高敏CRP)，RAS和血脂，并用B 超檢測病人同期心臟功能。
　　 結果：與入院即刻