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文檔簡介
1、到目前為止,樟蠶(Eriogynapyretorum)線粒體(mtDNA)基因組的結構、功能等方面的研究至今尚未見報道,而線粒體基因組對于研究樟蠶在系統(tǒng)進化及其與其它昆蟲的親緣關系的定位至關重要。 本研究利用樟蠶幼蟲為材料,提取樟蠶線粒體DNA。根據(jù)已知的家蠶、野蠶和柞蠶等線粒體基因組DNA序列,設計引物獲得了樟蠶mtDNA兩個片段,并克隆進pMD-18T載體中,測序后獲得了兩段序列,一段為452bp的序列,經(jīng)Blast檢索,該
2、序列包含樟蠶mtDNAATPase8基因全長,同時其上游還包含2個RNA基因,分別為tRNA-Lys和tRNA-Asp。另一段為781bp的序列,經(jīng)Blast檢索,為樟蠶mtDNAATPase6基因,下游為細胞色素氧化酶亞基Ⅲ基因的部分序列,把兩個片斷序列,用DNAstar軟件進行拼接,全長為1147bp。其中第86bp-156bp為tRNA-Lys基因,第179bp-251bp為tRNA-Asp基因,第252bp-413bp為ATPa
3、se8基因,第407bp-1084bp為ATPase6基因,推定獲得的序列包含了樟蠶線粒體基因組ATPase6和ATPase8基因的序列。并對該基因序列進行了基本性質的分析。 本文利用克隆的樟蠶mtDNAATPase8和ATPase6基因序列,通過檢索GenBank的其它14種昆蟲的mtDNAATPase8和ATPase6基因序列,進行了基因核苷酸序列和氨基酸序列的同源性比較,結果表明樟蠶與其它14種昆蟲的mtDNAATPase
4、8核苷酸同源性相似系數(shù)處于63.5%~91.4%之間,與柞蠶的相似系數(shù)最高,與Caecilius的相似系數(shù)最低;樟蠶mtDNAATPase6基因核苷酸序列與其它14種昆蟲的同源性相似系數(shù)處于67.9%~90.4%之間,與柞蠶、天蠶的相似系數(shù)最高,與Camponotus的相似系數(shù)最低。而且樟蠶與其它14種昆蟲的mtDNAATPase6和ATPase8基因總片段核苷酸水平同源性相似系數(shù)處于68.5%~90.5%之間,同樣與柞蠶、天蠶的相似系
5、數(shù)最高,與Camponotus的相似系數(shù)最低。 進一步對樟蠶和其它14種昆蟲的mtDNAATPase8基因核苷酸序列推定的氨基酸序列同源性進行比較,發(fā)現(xiàn)與其它14種昆蟲氨基酸相似系數(shù)處于27.5%~79.2%之間,與蓖麻蠶的相似系數(shù)最高,與Camponotus的相似系數(shù)最低;樟蠶與其它14種昆蟲mtDNAATPase6基因核苷酸序列推定的氨基酸同源性相似系數(shù)處于55.9%~96.0%之間,與蓖麻蠶、柞蠶的相似系數(shù)最高,與Camp
6、onotus的相似系數(shù)最低。樟蠶與其它14種昆蟲mtDNAATPase6和ATPase8基因總片段的氨基酸水平同源性相似系數(shù)處于50.9%~92.8%之間,與蓖麻蠶的相似系數(shù)最高,與Camponotus的相似系數(shù)最低。 依據(jù)DNAstar軟件中的Clustalw方法,繪制了15種物種mtDNAATPase6和ATPase8基因的核苷酸序列系統(tǒng)進化樹和其推定的氨基酸序列系統(tǒng)進化樹,從基于核苷酸和氨基酸序列同源性的分子系統(tǒng)樹來看,二
7、者在結構上基本一致,僅僅物種間的距離有所變化。在15種昆蟲的分子系統(tǒng)樹中,柞蠶與天蠶,家蠶與野蠶同源性高,樟蠶與蓖麻蠶、天蠶、柞蠶的同源性高于與家蠶、野蠶的同源性,但大大高于與雅庫巴果蠅、黑腹果蠅、毛里求斯果蠅、擬果蠅、玉米螟、岡比亞按蚊、四斑按蚊及Caeciliusquercus、Camponotusamericanus的同源性。 本研究獲得了樟蠶的mtDNAATPase6和ATPase8基因的序列,并進行了15種昆蟲線粒體基
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