AHL酶基因的克隆及序列分析.pdf

1、以馬鈴薯為實驗材料，對病原菌蘿卜E.C.C的致病能力進行驗證分析。確定實驗用量為50μl菌懸液。具體分析相同吸光度下每毫升病原菌和拈抗菌芽他桿菌、蘇云金芽孢桿菌的菌液中所含菌落數(shù)。結(jié)果表明，相同吸光度下不同菌種的每毫升菌液中含大致相同的菌數(shù)。然后利用馬鈴薯作為試驗材料對現(xiàn)有的菌種進行篩選，得到結(jié)果是對病原菌抑制作用較好的是蘇云金芽孢桿菌鲇澤變種ACCC10016，想利用農(nóng)桿菌試驗進一步證明所選菌種，結(jié)果沒能如愿。抑病試驗證明芽孢桿菌Bt

2、4和蘇云金芽孢桿菌山東亞種ACCC10314中含有水解AHLs的水解酶-AHLs水解酶。其中，Bt4和病原菌蘿卜E.C.C的菌落個數(shù)比為2：15，蘇云金芽孢桿菌山東亞種ACCC10314和病原菌蘿卜E.C.C的菌落個數(shù)比為3：15時，就能很好的抑制病原菌對馬鈴薯的侵染。 分別提取芽孢桿菌的基因組DNA，和載體的質(zhì)粒DNA。 根據(jù)文獻發(fā)表的基因序列設(shè)計特異性引物，以芽孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌的基因組DNA為模板進行PCR

3、擴增，得到兩個大小約為800bp的PCR產(chǎn)物，它們分別來自于Bt4和蘇云金芽孢桿菌山東亞種ACCC10314?；厥誔CR產(chǎn)物，命名為SS1和SS10。 核苷酸序列分析表明，所擴增的兩個基因片段大小均為753bp，和基因庫中已知的AHLs酶N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯酶基因aiiA的同源性達96％以上，其活性部位為“106HFDH～199H221D”。和其他一些蘇云金芽孢桿菌比較，同源性高達98％，其中的活性催化中心為Hisl19，Hi