IA型PI3K-Akt信號通路在胃腺癌中表達(dá)調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、Y1407284分類號：R573密級：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位√專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：l0062學(xué)號：20052174又蚌醬甜鼻垮TIANJIHMEDICALUNIVERSlTY碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：IA型P13K／Akt信號通路在胃腺癌中表達(dá)調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究TITLEStudyoftheactivationandmodulationofIATypeP13K／AktsignalingpathwayinG

2、astricadenocarcinoma一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：內(nèi)科學(xué)消化系病論文作者：宋小妹指導(dǎo)教師：張慶瑜天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二oo八年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證。結(jié)果：第一部分組織芯片結(jié)合免疫組化技術(shù)顯示IA型P13K／Akt通路中P13Kp85Q、pAkt、Ki67、Bcl一2、MMP一2在胃腺癌中均呈高表達(dá)，其表達(dá)水平隨腫瘤的演進(jìn)程度及惡性級別增高而增強(qiáng)。第二部分RealtimePCR結(jié)果提示，

3、轉(zhuǎn)染P13Kp85asiRNA后可明顯敲低染P13Kp85QmRNA的表達(dá)。Westernblot和免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)除P13Kp85Q的蛋白明顯敲低外，IA型P13K／Akt通路中pkkt、Ki67、Bcl一2、姍P一2的表達(dá)水平均明顯降低。MTT結(jié)果顯示P13Kp85QsiRNA組與轉(zhuǎn)染nonsensesiRNA組及對照組相比細(xì)胞增殖率明顯受抑(朋01)：hnnexinV檢測顯示P13Kp85asiRNA組細(xì)胞凋亡率明顯升高，進(jìn)一步應(yīng)

4、用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布發(fā)現(xiàn)S期細(xì)胞比例降低，細(xì)胞阻滯于GO／G1期；“劃痕”法遷移實(shí)驗(yàn)和2DMatrigel法顯示P13Kp85QsiRNA組較nonsensesiRNA組和對照組的細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)遷移能力降低(尸以01)；Transwell和3DMatrigel法顯示其侵襲能力減弱(尸以01)。第三部分成功建立SGC7901胃腺癌細(xì)胞系裸鼠皮下腫瘤后，每4天測量一次腫瘤體積，并在腫瘤局部多點(diǎn)注射siRNA和01igofectamine

5、混合物，發(fā)現(xiàn)和對照組相比，P13Kp85QsiRNA治療組腫瘤生長緩慢，從治療后的第20天起，腫瘤體積出現(xiàn)明顯差別，這種差別在觀察末期(32天)最顯著。應(yīng)用免疫組化法檢測腫瘤標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)P13Kp85a的蛋白明顯敲低的同時(shí)，IA型P13K／Akt通路中pAkt、Ki67、Bcl一2、MMP一2的表達(dá)水平均明顯降低。應(yīng)用TUNEL法檢測原位細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn)P13Kp85Q治療組凋亡細(xì)胞明顯增加。體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是一致的。結(jié)論：1免疫組化顯示

6、P13Kp85Q、pAkt、Ei67、Bcl2、MMP2在胃腺癌中都有過表達(dá)，表明工A型P13K／Akt信號通路在胃腺癌中是激活的，從而導(dǎo)致細(xì)胞增殖和侵襲。其中各種蛋白的表達(dá)相互關(guān)聯(lián)也驗(yàn)證了這一點(diǎn)。2應(yīng)用RNA干涉技術(shù)以01igofectamine介導(dǎo)siRNA靶向P13Kp85Q可有效敲低這個(gè)基因在人胃腺癌SGC7901細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，同時(shí)抑制IA型P13K／Akt通路的活性，從而抑制了細(xì)胞的增殖和侵襲，并誘發(fā)細(xì)胞凋亡。3裸鼠皮下胃腺癌