萊氏野村菌（Nomuraea rileyi）cq菌株（Nr-cq0310）的研究.pdf

1、萊氏野村菌是一種重要昆蟲病原真菌，可以感染許多重要的經(jīng)濟(jì)害蟲如棉鈴蟲(Helicoverpaarmigera)，斜紋夜蛾(Spodopteralitura)，粉紋夜蛾(Trichoplusiani)等，并在田間引發(fā)多種害蟲病害流行病，在害蟲綜合防治(IPM)中有很大的應(yīng)用潛力。國外對此菌研究較早，但國內(nèi)研究較少。本實驗室從蠶體分離到一菌株(Nr-cq0310菌株)，對其形態(tài)學(xué)進(jìn)行了研究，并初步闡明了其生長發(fā)育、培養(yǎng)和感染等相關(guān)問題；此外

2、，對其影響其生長發(fā)育的環(huán)境因子也進(jìn)行了研究，明確了適宜菌株生長、發(fā)育和產(chǎn)孢的環(huán)境因素；最后，初步研究了其致病性及規(guī)模培養(yǎng)。研究結(jié)果如下： 1.萊氏野村菌cq(Nr-cq0310)菌株的形態(tài)學(xué)分生孢子呈卵圓形或橢圓形，一端稍尖，一端略鈍；孢子表面光滑，淡綠色。有些孢子之間有連接，并且孢子末端具明顯的末端殘留物。分生孢子大小為3.2-4.6×2.5-3.2μm；分生孢子梗直立，單生，大小-160×3.2-5.1μm，3-4個輪狀分支

3、，分支處著生2-3個瓶梗，梗單列或者雙列。瓶梗基部膨大，具短尖，其上著生一個或多個分生孢子。經(jīng)比較，此菌株隸屬于野村屬，是模式種萊氏野村菌的不同菌株，命名為萊氏野村菌cq(Nr-cq0310)菌株。分生孢子接種到培養(yǎng)基上，24h開始發(fā)芽，大多為隨機一端發(fā)芽，但也有孢子兩端(兩極)發(fā)芽現(xiàn)象。芽管尖端的菌絲向孢子內(nèi)側(cè)彎曲。內(nèi)容物經(jīng)芽管釋放后，孢子顏色隨之變淺。菌絲由芽管伸長形成，分支，幾天后擴展成菌絲體。 2.菌株固體和液體培養(yǎng)研究

4、發(fā)現(xiàn)固體斜面上，菌株的產(chǎn)孢能力明顯優(yōu)于白僵菌，培養(yǎng)7-10天菌株可見大量綠色分生孢子生成，后期孢子大量堆積，呈灰綠色，而白僵菌菌絲生長豐富，僅檢測到少量分生孢子；平板培養(yǎng)時，菌株分泌物質(zhì)刺激培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基形成突起，菌落小，擴散慢。菌落邊緣先生成環(huán)形外圈綠色孢子粉層，后向中心蔓延，慢慢出現(xiàn)綠色分生孢子層，孢子堆干燥結(jié)構(gòu)松散，較容易飛散；液體振蕩培養(yǎng)，接種2-3天后菌絲糾集呈菌膜樣團(tuán)塊粘附到孢壁，隨培養(yǎng)時間延長越來越大，最后形成緊密的菌絲

5、球，周邊呈輻射狀菌絲分布，較均勻。 3.對家蠶的感染形態(tài)家蠶體內(nèi)感染研究發(fā)現(xiàn)，感染的家蠶體內(nèi)有大量豆莢狀或筒狀或酵母狀芽生孢子。感染后3-4天，血液鏡檢就可見短菌絲，再過1-2天芽生孢子大量出現(xiàn)，此時蠶血液出現(xiàn)乳白色渾濁。芽生孢子豆莢狀，明顯隔膜；有的酵母狀，有隔膜，在靠近隔膜處形成液泡樣空泡，總體呈酵母狀；有的芽生孢子圓筒狀，清晰隔膜，在芽生孢子中間兩個隔膜靠近中點處，有明顯的突起，幾乎每個芽生孢子都見，另外可見兩隔膜中間細(xì)胞

6、的孢質(zhì)等內(nèi)容物呈絮團(tuán)狀向突起聚集，推測突起可能為孢子發(fā)育分支擴展的起始步驟。家蠶感染后，2-3天出現(xiàn)輪狀病斑，中間顏色淺，外周顏色深，為褐色，在腹側(cè)病斑較多。蠶取食減緩，行動呆滯，蠶體緊繃(甚至有點發(fā)亮)，有彈性，頭部稍稍伸直，身體逐漸硬化。高濕度條件下，1天后蟲尸布滿白色菌絲，隨后菌絲逐漸轉(zhuǎn)變成綠色，使僵化的尸體覆蓋一層鮮綠色的孢子粉，孢子容易飛散，自然條件下分生孢子就可以在蟲尸周圍彈射。 4.萊氏野村菌Nr-cq0310菌株

7、晶體的發(fā)現(xiàn)菌株體外培養(yǎng)時，我們觀察到培養(yǎng)基中有大量的結(jié)晶，晶體呈八面體菱形，比較規(guī)則，各種培養(yǎng)條件下看到的晶體形狀比較一致，這是首次報道體外萊氏野村菌產(chǎn)生晶體的現(xiàn)象。同時家蠶體表挑取菌絲觀察時也看到了結(jié)晶。 5.環(huán)境因子對萊氏野村菌Nr-cq0310菌株生長發(fā)育的影響研究了環(huán)境因子對Nr-cq0310菌株的生長、產(chǎn)孢與孢子萌發(fā)的影響。研究顯示，溫度對菌株的生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)有相同的效應(yīng)，低溫23℃是最適溫度，32℃以上明顯抑制

8、該菌的生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)；最適宜生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)的pH范圍為6.2-7.0；24h光照有利于產(chǎn)孢，而24h黑暗有利于菌落生長；紫外線(40W，45cm)照射2min，培養(yǎng)96h該菌株孢子發(fā)芽率較對照降低16﹪，照射8min孢子發(fā)芽率僅為7﹪。 6.萊氏野村菌Nr-cq0310菌株對甜菜夜蛾的感染及菌株規(guī)模培養(yǎng)的初步研究甜菜夜蛾感染試驗發(fā)現(xiàn)，4天后發(fā)現(xiàn)有甜菜夜蛾死亡，比較而言，Nr-cq0310菌株病程較短，比較有應(yīng)用潛力。