長(zhǎng)托寧對(duì)癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)后大鼠海馬神經(jīng)元保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：長(zhǎng)托寧(鹽酸戊乙奎醚注射液)是一種新型的腦保護(hù)劑，有報(bào)道顯示長(zhǎng)托寧可以減輕急性全腦缺血/再灌注時(shí)腦組織損傷，起到腦保護(hù)作用。但長(zhǎng)托寧對(duì)癲癇持續(xù)狀態(tài)導(dǎo)致的腦損傷是否有保護(hù)作用尚未見研究報(bào)道。本研究用長(zhǎng)托寧預(yù)處理，采用氯化鋰-匹羅卡品腹腔注射的方法制備癲癇持續(xù)狀態(tài)模型，觀察癲癇持續(xù)狀態(tài)后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠海馬組織凋亡相關(guān)基因Caspase-3、Bcl-2的表達(dá)情況，并且與山莨菪堿相比較，探討長(zhǎng)托寧干預(yù)對(duì)癲癇持續(xù)狀態(tài)導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷的影響及

2、可能機(jī)制，以期為長(zhǎng)托寧應(yīng)用于臨床癲癇持續(xù)狀態(tài)的治療提供可能的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：健康成年雄性Wistar大鼠78只隨機(jī)分為對(duì)照組(n=6只)、模型組(n=24只)、山莨菪堿組(n=24只)和長(zhǎng)托寧組(n=24只)，后三組又分別分為四個(gè)亞組，每個(gè)亞組6只，用于6h、12h、24h、48h。山莨菪堿組和長(zhǎng)托寧組分別在造模前提前15分鐘腹腔注射山莨菪堿15mg/kg，長(zhǎng)托寧2mg/kg，每12小時(shí)重復(fù)腹腔注射一次，劑量同前。對(duì)

3、照組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)腹腔注射等容量的生理鹽水。15分鐘后模型組、山莨菪堿組、長(zhǎng)托寧組按127mg/Kg給予腹腔注射氯化鋰，18小時(shí)后再腹腔注射新鮮配制的匹羅卡品30mg/Kg，制備癲癇持續(xù)狀態(tài)模型，同時(shí)給對(duì)照組大鼠腹腔注射等容量的生理鹽水。觀察大鼠出現(xiàn)癇性發(fā)作的時(shí)間和表現(xiàn)，造模過(guò)程中大鼠死亡或不符合模型要求，予以剔除并隨機(jī)補(bǔ)充，以保證每組動(dòng)物數(shù)量。在癲癇持續(xù)狀態(tài)后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦，對(duì)海馬組織進(jìn)行研究，HE染色，光鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化，原位末

4、端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)大鼠海馬神經(jīng)元凋亡，免疫組化法檢測(cè)Bcl-2和Caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：TUNEL、bcl-2和Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞在對(duì)照組僅有微量的基礎(chǔ)表達(dá)，模型組、山莨菪堿組和長(zhǎng)托寧組癲癇持續(xù)狀態(tài)后6h海馬組織可見TUNEL、Caspase-3和Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)增多,TUNEL和Caspase-3表達(dá)高峰均在24h；Bcl-2表達(dá)高峰在12h。山莨菪堿組和長(zhǎng)托寧組各時(shí)間點(diǎn)TUNEL、C

5、aspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較模型組明顯減少(除6h時(shí)外，均為P＜0.05)，而Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增加(除6h外，均為P＜0.05)，且長(zhǎng)托寧組較山莨菪堿組變化明顯(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：(1)長(zhǎng)托寧和山莨菪堿預(yù)處理不能完全防止癲癇持續(xù)狀態(tài)發(fā)生，但可延遲其出現(xiàn)的時(shí)間，并減輕其發(fā)作強(qiáng)度，顯著減輕海馬神經(jīng)元的損傷，提示其神經(jīng)保護(hù)作用的存在。(2)癲癇持續(xù)狀態(tài)后Caspase-3和bcl-2蛋白的表達(dá)均出現(xiàn)變化，證實(shí)這兩種