miR-34a在癲癇持續(xù)狀態(tài)后大鼠海馬神經(jīng)元凋亡發(fā)生中的作用.pdf

1、目的：
　　 觀察大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)（status epilepticus，SE）后海馬區(qū)腦組織miR-34a的表達(dá)分布規(guī)律;通過干預(yù)miR-34a表達(dá)水平，探討其在癲癇后海馬神經(jīng)元凋亡中的作用。
　　 方法：
　　 1.建立模型:采用6～8周齡健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為空白對照組(Normal，N組)，癲癇組(Epilepsy，Ep組)，干預(yù)組(Antagomir，A組)和干預(yù)對照組（Antagomir-cont

2、rol，C組）。對EP組、A組、C組建立氯化鋰一匹羅卡品致癇大鼠SE模型。在SE誘導(dǎo)成功后4-6小時(shí)分別對A組和C組側(cè)腦室立體定向給予Antagomir和Antagomir-control干預(yù)miR-34a表達(dá)水平，各組均以在1天（24小時(shí)，急性期）、7天（靜止期）作為研究時(shí)間點(diǎn)。
　　 2.對大鼠行腦電圖檢查，記錄生理狀態(tài)、致癇期Ⅳ級以上發(fā)作狀態(tài)、造模成功后發(fā)作間期狀態(tài)、自發(fā)發(fā)作狀態(tài)的腦電變化，確認(rèn)癲癇模型的建立。
　　

3、 3.實(shí)時(shí)定量-PCR檢測各組miR-34a表達(dá)水平，檢測干預(yù)前后miR-34a表達(dá)量的變化，以驗(yàn)證藥物干預(yù)miR-34a的效果。
　　 4.采用Western Blot和免疫組化技術(shù)檢測caspase-3蛋白在大鼠海馬組織中的分部及其表達(dá)量的變化。
　　 5.TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTPnick-end-labeling)法檢測大鼠

4、SE后海馬區(qū)腦組織神經(jīng)元細(xì)胞凋亡情況。
　　 6.Nissl染色研究大鼠SE后海馬區(qū)腦組織神經(jīng)元細(xì)胞缺失及存留情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.依據(jù)動(dòng)物行為學(xué)表現(xiàn)及腦電圖結(jié)果，最終造模組（Ep組、A組、C組）大鼠成模率為89.17％。成模及干預(yù)后，大鼠因自身恢復(fù)、麻醉意外、手術(shù)創(chuàng)傷等因素，部分發(fā)生死亡，最終可用實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的成活率為69.17％。
　　 2.實(shí)時(shí)定量PCR檢測顯示，在急性期和靜止期，miR-3

5、4a的表達(dá)在Ep組較N組均顯著增高，藥物干預(yù)后A組較C組均顯著降低，有顯著性差異，干預(yù)有效。
　　 3.Western Blot檢測顯示，在急性期和靜止期，caspase-3蛋白的表達(dá)在Ep組較N組均顯著增高，藥物干預(yù)后A組較C組均顯著降低，有顯著性差異，與實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果趨勢相一致。
　　 4.免疫組化檢測顯示，在急性期和靜止期，Ep組與藥物干預(yù)對照C組中caspase-3蛋白在海馬（CA1、CA3區(qū)）神經(jīng)元胞漿均高

6、表達(dá)，而N組和藥物干預(yù)A組均僅有較低密度的表達(dá)，與Western Blot結(jié)果相一致。
　　 5.TUNEL檢測顯示，在急性期和靜止期，Ep組海馬(CA1、CA3區(qū)）神經(jīng)元細(xì)胞凋亡均明顯多于N組;藥物干預(yù)后A組海馬(CA1、CA3區(qū))神經(jīng)元細(xì)胞凋亡均明顯低于C組，與實(shí)時(shí)定量PCR、WesternBlot、免疫組化結(jié)果相一致。
　　 6.Nissl染色顯示，在急性期和靜止期，Ep組海馬(CA1、CA3區(qū))神經(jīng)元細(xì)胞損失均明