血液PEA檢測鑒別PA感染與定植的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過建立PA(銅綠假單胞菌)感染與定植模型,探討應(yīng)用FQ-PCR(實(shí)時熒光定量pcr)檢測血液中PEA(銅綠假單胞菌外毒素)在PA感染及定植時相對表達(dá)量及血清細(xì)胞因子TNF-α(腫瘤壞死因子α)、IL-6(白介素-6)等差異的臨床價值。方法:54只清潔型雄性SD大鼠由瀘州醫(yī)學(xué)院動物中心提供。所有大鼠均予以地塞米松磷酸鈉3mg/kg,皮下注射7天。隨機(jī)分為感染模型組(簡稱模型組,18只,從氣管注入2個麥?zhǔn)蠁挝坏腜A細(xì)菌液0.4ml)

2、、口咽部定植組(簡稱定植組,18只,從咽喉及鼻腔滴入與模型組相同濃度細(xì)菌液0.2ml)、生理鹽水對照組(簡稱對照組,18只,從氣管注入生理鹽水0.4ml)。于接種后第3、7、11天分別處死大鼠6只,取定植組咽拭子涂片培養(yǎng)觀察PA菌落,左側(cè)肺組織勻漿并稀釋后培養(yǎng)計(jì)數(shù)細(xì)菌,右肺下葉行HE染色切片并觀察炎癥程度。心臟采血,用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-timefluorescentquantitativepolymerasechain

3、reaction,FQ-PCR)檢測血液中PEA相對表達(dá)量,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)測定血清中TNF-α、IFN-r、IL-6、IL-8濃度。結(jié)果:1、細(xì)菌培養(yǎng):定植組咽拭子均可見PA菌生長,其中以接種后第3、7天細(xì)菌數(shù)最多;2、肺組織培養(yǎng):模型組在三個時間點(diǎn)均見大量PA菌落,其中第3、7天菌落數(shù)>105cfu/肺,第11天>103cfu/肺,定植組在各時間點(diǎn)僅

4、見少量細(xì)菌生長,對照組肺組織培養(yǎng)未見PA細(xì)菌;3、病理切片觀察:模型組在第3、7天肺泡炎程度較重,見大量炎性細(xì)胞浸潤,紅細(xì)胞滲出,肺泡腔內(nèi)有水腫液,第11天表現(xiàn)為炎細(xì)胞浸潤減少,肺泡間隔增厚,淋巴細(xì)胞,巨噬細(xì)胞出現(xiàn),而定植組與對照組病理改變無明顯差別,表現(xiàn)為正常肺組織結(jié)構(gòu)。4、ELISA檢測細(xì)胞因子:血漿IL-6、 IL-8、IFN-r、TNF-a變化模型組較其它兩組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05),而定植組和對照組含量無統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)差異(P>0.05);模型組中以第3天時增高更為顯著。5、PEA DNA檢測模型組各個時間點(diǎn)血液中PEA DNA相對表達(dá)量均較對照組和定植組明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),對照組和定植組兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論：模型組細(xì)胞因子含量、DNA相對表達(dá)量及病理改變均較其余兩組明顯,而對照組和定植組之間無明顯差異,通過建立感染與定植模型,運(yùn)用FQ-PCR測定血液中PEA DNA在不同狀態(tài)下的表達(dá)量的差異,可以為