添加幾種維生素飲食對人食管癌細胞增殖影響及其機制研究.pdf

1、本研究首先觀察模擬成都成人飲食喂飼大鼠對其生長的影響，初步探討用成人飲食喂飼大鼠的可行性；用喂飼常規(guī)飼料的大鼠血清培養(yǎng)人食管癌細胞，探討大鼠血清取代小牛血清培養(yǎng)細胞的可行性；從而建立飲食與食管癌研究的血清生理學(xué)方法。本研究采用血清生理學(xué)方法分別觀察成都成人飲食、鹽亭食管癌高發(fā)區(qū)病人飲食以及添加幾種維生素(組合1：維生素A、E、葉酸；組合2：維生素A、E、葉酸、核黃素、維生素C)的鹽亭飲食喂飼大鼠血清對人食管癌細胞生長增殖的影響，為探討飲

2、食營養(yǎng)因素在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用提供新技術(shù)，為食管癌高發(fā)區(qū)居民調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)和食管癌高危人群制定營養(yǎng)干預(yù)措施提供實驗依據(jù)。本研究采用RT-PCR定量技術(shù)及細胞免疫熒光法，分別觀察鹽亭飲食及添加幾種維生素的鹽亭飲食喂飼大鼠血清對人食管癌細胞周期調(diào)控因子表達的影響，探討鹽亭飲食及維生素在食管癌發(fā)展中的分子機制，為尋找新的基因治療靶位提供實驗依據(jù)。 方法： (1)模擬成都成人飲食(以下簡稱成都飲食)喂飼大鼠，同時設(shè)立大鼠常規(guī)飼料

3、對照組，觀察成都飲食對大鼠采食量及體重的影響，探討成人飲食喂飼大鼠的可行性。 (2)采用MTT法繪制細胞生長曲線，篩選不同濃度、滅活與否的大鼠空白血清(喂飼常規(guī)飼料的大鼠血清)對人食管癌細胞的最佳作用條件；通過設(shè)立小牛血清對照以及人正常肝上皮細胞對照，進一步完善血清生理學(xué)方法。 (3)通過MTT法繪制細胞生長曲線、計算細胞群體倍增時間、<'3>H-TDR摻入實驗測定細胞DNA合成及流式細胞術(shù)分析細胞周期，分別觀察喂飼成都

4、飲食、鹽亭飲食及添加幾種維生素(組合1：維生素A、E、葉酸；組合2：維生素A、E、葉酸、核黃素、維生素C，各設(shè)高低兩個劑量)鹽亭飲食的大鼠血清對人食管癌細胞生長增殖的影響。 (4)采用RT-PCR定量技術(shù)及細胞免疫熒光法，分別探討鹽亭飲食及添加幾種維生素的鹽亭飲食喂飼大鼠血清對人食管癌細胞中參與細胞周期調(diào)控的原癌基因CyclinD1、細胞周期素依賴性激酶CDK4及抑癌基因P16、Rb在mRNA、蛋白水平表達的影響。 結(jié)果

5、： (1) 本實驗?zāi)M成都飲食喂飼大鼠，其采食量明顯低于大鼠常規(guī)飼料組，但其體重增長與大鼠常規(guī)飼料組無明顯差異，表明成都飲食對大鼠生長無明顯影響。 (2)本實驗用不同濃度、滅活與否的大鼠空白血清(喂飼常規(guī)飼料的大鼠血清)取代細胞培養(yǎng)液中傳統(tǒng)的小牛血清來培養(yǎng)人食管癌細胞，篩選出5％未滅活大鼠空白血清最適合癌細胞生長。5％未滅活大鼠空白血清對人正常肝上皮細胞生長的影響與小牛血清對照作用相近，提示該血清同樣適合正常細胞生長。

6、 (3)細胞生長曲線、細胞群體倍增時間、DNA合成及細胞周期分布結(jié)果表明，與小牛血清對照相比，鹽亭飲食喂飼大鼠血清明顯促進人食管癌細胞生長增殖、卻抑制人正常肝上皮細胞生長增殖；而成都飲食喂飼大鼠血清對兩株細胞的作用均與小牛血清對照相近。添加幾種維生素的鹽亭飲食喂飼大鼠血清則逆轉(zhuǎn)了鹽亭飲食喂飼大鼠血清對兩株細胞的作用，尤以兩個維生素組合的高劑量作用較明顯。 (4)喂飼鹽亭飲食的大鼠血清處理人食管癌細胞后，細胞中原癌基因Cyc

7、linD1及CDK4在mRNA及蛋白水平均異常高表達，同時還伴有抑癌基因P16低表達，抑癌基因Rb有低表達趨勢，但變化不明顯。而添加幾種維生素的鹽亭飲食喂飼大鼠血清則逆轉(zhuǎn)了鹽亭飲食喂飼大鼠血清的作用，尤以兩個維生素組合的高劑量作用較明顯。 結(jié)論： (1)模擬成人飲食喂飼大鼠是可行的。 (2)大鼠血清取代小牛血清培養(yǎng)人食管癌細胞Eca-109是可行的。 (3) 與成都成人飲食喂飼大鼠血清相比，鹽亭食管癌高發(fā)

8、區(qū)病人飲食喂飼大鼠血清明顯促進人食管癌細胞增殖、卻抑制人正常肝上皮細胞增殖，提示鹽亭飲食中可能存在促癌因素。 (4)添加幾種維生素(組合1：維生素A、E、葉酸；組合2：維生素A、E、葉酸、核黃素、維生素C)的鹽亭飲食喂飼大鼠血清明顯抑制人食管癌細胞增殖、卻促進人正常肝上皮細胞增殖，逆轉(zhuǎn)了鹽亭飲食喂飼大鼠血清對兩株細胞增殖的作用，提示維生素充足時可保護上皮細胞免于致癌物攻擊，而缺乏時則可能成為促癌因素。 (5)鹽亭飲食喂飼