抗恥垢分枝桿菌的化學遺傳學篩選方法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、當前在全球范圍內,結核病治療面著非常嚴峻的形勢。一方面,新藥研發(fā)耗費大,周期長;另一方面,細菌耐藥性問題愈發(fā)嚴重。尋找新的藥物作用靶點是解決上述問題的關鍵。
　　本論文以化學基因組學為基礎,借鑒“高拷貝抑制技術”,在恥垢分枝桿菌(Mycobacterium,smegmatis)中過表達其基因組的各個基因,通過篩選對活性化合物抗性增加的克隆,尋找可能的作用靶點。
　　將來自穿梭質粒pMV261的oriM和aph基因插入到pCC

2、1FOS載體而獲得穿梭載體pEMAC,并用該載體住E.coli構建了M.smegmatis基因組文庫。在將該載體及文庫質粒導入M.smegmatis后,發(fā)現這些質粒在M.smegmatis中不能穩(wěn)定存在。為解決質粒不穩(wěn)定問題,先后嘗試用pMINDcos1載體構建文庫和使用pMV261載體構建小片段文庫(插入片段3.5～4.5 kb),同時通過敲除M.smegmatis recA基因以及對文庫質粒去甲基化等手段試圖提高質粒穩(wěn)定性。

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