特殊生境放線菌的抗恥垢分枝桿菌活性篩選及一株陽性菌株的初步研究.pdf

1、隨著陸生放線菌資源不斷被發(fā)掘和深入研究,常規(guī)發(fā)酵方法下所得到的次生代謝產物資源越來越稀少,為新藥發(fā)現(xiàn)造成阻礙。目前,很多學者已經把目光投向了一些特殊生境中的放線菌,包括海洋、動植物內生和一些極端環(huán)境。近些年來,由于耐藥結核菌(XDR-TB,MDR-TB)的產生和傳播,使全球范圍的結核病疫情有上升趨勢。耐藥菌株對臨床上常用的利福平等藥物已產生嚴重耐藥性,近五十年未發(fā)現(xiàn)新靶點的抗結核臨床一線藥物。因此,尋找具有抗結核分枝桿菌活性的新化合物仍

2、是制藥領域所迫切需要的。而特殊生境中的放線菌次生代謝產物在結構和生物活性方面具有豐富多樣性,是尋找新型抗結核藥物的潛力資源。
　　 因為許多藥物類似物對靶點發(fā)揮抑制作用的具體機制還無法確定,所以在新藥篩選的方法上,基于活性的傳統(tǒng)天然產物藥物的篩選仍具有很大優(yōu)勢。這需要依賴于全細胞水平的體外實驗。
　　 本文以恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegrnatir)為指示菌,對實驗室分離純化的296株來源于海底底泥

3、、紅樹林植物、高原土樣和蜚蠊內生的放線菌進行抗恥垢分枝桿菌活性篩選,發(fā)現(xiàn)46株陽性菌株,分布于鏈霉菌屬和小單胞菌屬.陽性率為15.5％。選取四種固體培養(yǎng)基及四種液體培養(yǎng)基對46株陽性菌株進行培養(yǎng)基篩選,每種培養(yǎng)基均發(fā)酵100 mL獲得發(fā)酵物。共得到368個樣品。測定粗提物樣品的抗恥垢分枝桿菌活性,并綜合產量因素從中選出19株活性較高的優(yōu)勢菌株及其發(fā)酵的培養(yǎng)基。將19株優(yōu)勢菌株進行1 L規(guī)模的發(fā)酵,發(fā)酵產物采用反相柱層析初步分離成為幾個組

4、分,建立一個具有抗恥垢分枝桿菌活性的次生代謝產物組分庫。
　　 組分庫可繼續(xù)用于抗恥垢活性化合物的追蹤分離,并且支持其它拮抗活性模型的篩選。本文采用MTT法對次生代謝產物組分庫進行了抗HeLa和HepG-2腫瘤細胞活性的篩選。
　　 鏈霉菌AR47為一株篩選出的優(yōu)勢陽性菌株,粗提物在改良LB平板上測抗恥垢分枝桿菌的活性良好。本文對其燕麥培養(yǎng)基發(fā)酵得到的次生代謝產物作了初步研究,分離純化得到兩個化合物Q-A-1及Q-A-4