豬口蹄疫亞洲Ⅰ型病毒分離鑒定、VP1基因和疫苗免疫研究.pdf

1、本研究從規(guī)?；i場(chǎng)分離到一株豬源病毒，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)、電鏡觀(guān)察、乳鼠血清中和實(shí)驗(yàn)，以及送中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所口蹄疫國(guó)家參考實(shí)驗(yàn)室鑒定為口蹄疫亞洲Ⅰ型病毒。對(duì)病變細(xì)胞進(jìn)行超速離心，電鏡負(fù)染可見(jiàn)大小約25-30nm的病毒粒子；血清中和實(shí)驗(yàn)，F(xiàn)MDVAsiaI標(biāo)準(zhǔn)血清組乳鼠存活，其余FMDV標(biāo)準(zhǔn)血清組、對(duì)照組乳鼠死亡。 根據(jù)GenBank中的FMDVAsiaI的全基因序列，在VP1基因兩端設(shè)計(jì)一對(duì)引物，擴(kuò)增出1012bp的VP1

2、衣殼蛋白的完整片段。通過(guò)對(duì)病毒VP1基因的測(cè)序顯示：本次分離株VP1cDNA全長(zhǎng)633bp，GC含量為59.56％。該毒株與中國(guó)報(bào)道株的同源性在82.0％-99.2％之間，與國(guó)外報(bào)道序列的同源性在82:9％-98.4％之間。同源性比較顯示本次分離毒株不屬于2001年報(bào)道口蹄疫亞洲Ⅰ型的4個(gè)基因型。結(jié)果顯示我國(guó)口蹄疫亞洲Ⅰ型病毒為兩個(gè)不同基因性的流行，即06年以前以Gansu1、Yunnan株為代表的GenotypesⅣ，還有06年后報(bào)道

3、的和本次分離株的新基因型。比較顯示本次分離株在149突變?yōu)楦彼?Pro)和154位突變?yōu)樘於彼?Asp)，該兩處的氨基酸突變?cè)谄渌麍?bào)道序列中未見(jiàn)報(bào)道。 本試驗(yàn)選擇母豬70頭，小豬70頭，隨機(jī)均分為7組，每組母豬10頭，小豬10頭，分別編為1-7組(1-3組采用口蹄疫AsiaI-0二價(jià)疫苗，4-6組采用口蹄疫AsiaI單價(jià)疫苗，7組為正常免疫0型疫苗組)，分別按正常免疫劑量、1.5倍劑量、正常免疫劑量免疫后15日加強(qiáng)一次共三個(gè)

4、劑量組進(jìn)行肌肉注射免疫。各組均正常飼養(yǎng)，于免疫后0、7、15、30、60、90、120日時(shí)耳靜脈采血并分離血清。采用國(guó)際獸疫局推薦的液相阻斷酶聯(lián)免疫反應(yīng)(LPB-ELISA)檢測(cè)口蹄疫抗體效價(jià)。注射劑量比較表明，母豬采用1.5倍劑量、仔豬采用加強(qiáng)免疫其免疫抗體滴度水平高于另外兩種方法；不同疫苗產(chǎn)生抗體滴度比較表明，采用口蹄疫AsiaI型單價(jià)滅活疫苗免疫后所產(chǎn)生的抗體滴度高于使用口蹄疫AsiaI-0型雙價(jià)滅活疫苗試驗(yàn)組；口蹄疫0型抗體滴度

5、的比較表明，采用口蹄疫AsiaI-0型雙價(jià)滅活疫苗進(jìn)行免疫時(shí)，0型抗體和采用單價(jià)苗免疫結(jié)果差異不顯著：對(duì)免疫后抗體滴度達(dá)到保護(hù)的豬只數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示采用AsiaI-0型二價(jià)疫苗組免疫后抗體滴度能達(dá)到保護(hù)的母豬有70％、小豬有60％：AsiaI單價(jià)苗免疫后抗體滴度能達(dá)到保護(hù)的母豬有83％、小豬有73％： 對(duì)試驗(yàn)豬抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，豬群在免疫后15日左右出現(xiàn)最高抗體滴度，隨后逐漸減弱。同時(shí)通過(guò)加強(qiáng)免疫組監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，抗體滴度l